АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Выявление Col-плазмид

Читайте также:
  1. Анализ технических требований чертежа, выявление технологических задач и условий изготовления детали
  2. блок. Выявление уровня готовности руководства ДОУ к реализации методических рекомендаций по формированию имиджа ДОУ
  3. Вопрос 85. Профилактика, раннее выявление и ранняя комплексная помощь детям с отклонениями в развитии
  4. Выявление (выделение) основных процессов
  5. Выявление брака материальных ресурсов, оформление актов на полученную бракованную продукцию.
  6. Выявление и коррекция нечестности
  7. Выявление и устранение случайных промахов
  8. Выявление и формулировка проблем
  9. Выявление конъюгативных R-плазмид
  10. Выявление налоговых преступлений
  11. Выявление первых признаков заболевания, раннее распознавание болезни, как основные задачи фельдшера.

Исследование проводят методом отсроченного антагонизма по Фредерику. Испытуемые культуры (например шигеллы Зонне) засевают уколом в 1,5% мясо-пептонный агар по 4-5 штаммов на одну чашку Петри. После инкубирования в течение 24 ч при 37°С выросшие макроколонии стерилизуют парами хлороформа. С этой целью чашку размещают вверх дном и на внутреннюю поверхность крышки наносят 4-6 капель хлороформа. Через 30 мин хлороформ удаляют, выдерживая чашки с открытой крышкой 15-20 мин. Затем поверхность агара заливают слоем расплавленного и охлажденного до 48°С 0.7% мясо-пептонного агара (5 мл), предварительно смешанного 0,1 мл шестичасовой бульонной культуры индикаторного штамма (например E.coli W1655). После суточной инкубации при 37°С учитывают результат. Бактерии имеют Col-плазмиду (продуцируют колицин), если вокруг их макроколоний образовались зоны подавления роста индикаторной культуры на фоне ее роста сплошным газоном в остальных участках среды. Идентификацию вида Col-плазмид осуществляют этим же методом, используя коллекцию эталонных индикаторных культур с известной резистентностью или чувствительностью к колицинам.


Рис. 1. Выявление генетических маркеров в реакции гибридизации нуклеиновых кислот. Для простоты показаны лишь тесты с радиоактивномеченым ДНК-зондом; возможность других меток предполагается (см. текст). В фильтрационном тесте образцы ДНК денатурируют и наносят на мембрану. После инкубации с ДНК-зондом положительные образцы выявляют путем авторадиографии. При гибридизации in situ манипуляции с ДНК проводят в интактных образцах ткани, фиксируемых на предметном стекле. После инкубации с ДНК-зондом на стекло наносят фотографическую эмульсию. В зонах радиоактивной эмиссиии (т.е. там, где произошла гибридизация) на ней проявляются темные микроскопические гранулы. При гибридизации в растворе смесь ДНК-зонда и денатурированного образца инкубируют в жидкой среде. После гибридизации двухспиральные молекулы-гибриды осаждают из раствора на специальных корпускулах и отмывают от несвязанного ДНК-зонда. Присутствие в пробе ДНК-фрагмента с искомой последовательностью выявляют по радиоактивности осадка [Schaechter M., Medoff G., Eisenstein B.I. (eds.). Mechanisms of Microbial Disease. Williams &Wilkins, 1993]

 

Дочерние ДНК
Праймер
ДНК
100 000 000 ампликонов
20-30 циклов
Электрофорез в агарозном геле
Синтез комплементарных нитей ДНК. 70-72°С, taq-полимераза, ДНТФ.
Отжиг праймеров. 50-60°С, 20-60 секунд.
Термическая денатурация ДНК. 94°С, 30-40 секунд
СХЕМА ПЦР


1 | 2 | 3 |

Поиск по сайту:



Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.003 сек.)