Роллерные клеточные культуры

Для получения большого количества клеточного материала культуры выращивают во вращающихся сосудах, которые помещают в барабаны с гнездами. Рост клеток происходит по всей внутренней поверхности сосуда, выход клеток возрастает в 10-20 раз. Их используют для получения (бройлерных???) биопрепаратов.

Суспензионные клеточные культуры

Клетки выращивают в суспензии при постоянном помешивании питательной среды в специальных ферментах, суспензию аэрируют (+СО2, +О2), воздух пропускают через бактериальный фильтр. Чтобы клетки не прикреплялись к стенкам сосуда, имеются специальные лопасти. При выращивании клетки проходят 4 стадии роста: латентную, фазу логарифмического роста, стационарную фазу, фазу разрушения. Длительность этих фаз зависит от вида клеток и особенностей культивирования. При непрерывном культивировании поддерживают размножение клеток в логарифмической фазе. Этот метод наиболее часто применяется в биотехнологии для получения иммунных препаратов. Для увеличения выхода клеток используют различные методы клеток.

Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.

В вирусологической практике часто используемые биологические модели бывают загрязнены различной микрофлорой, агентами, такими, как бактерии, грибы, микоплазмы, вирусы. Присутствие каких-либо живых агентов в незараженных лабораторных моделях называют контаминацией или скрытым носительством. Свыше 20 различных контаминантов способны поражать эмбрионы птиц и культуры клеток млекопитающих.

Бактерии

Сальмонеллы, синегнойная палочка, вульгарный протей, эшерихия…

Вирусы

Лейкозосаркоматозный комплекс, вирус болезни Марека, парагриппа-2, инфекционного бронхита

Микоплазмы, Л-формы бактерий.

Контаминирующие агенты вступают в различные взаимодействия с теми возбудителями, которыми заражают биологические модели, что приводит к ложным результатам. Может происходить интерференция – подавление одного другим, и экзальтация – усиление одного другим.

Контаминанты представляют очень большую опасность при изготовлении живых вакцин из куриных эмбрионов.

В куриные эмбрионы они попадают от кур, через скорлупу, в клеточные культуры - из исходных тканей, с компонентами питательных сред. Также в процессе работы с питательными средами возможна их контаминация.

Выявить контаминанты сложно, так как видимых изменений в культуре они не вызывают. При их обнаружении проводят деконтаминацию.

От бактерий – антибиотиками, от микоплазм – тимам, катамицин, иммунная сыворотка

Яйца перед инкубацией обрабатывают нагреванием до 42градусов Цельсия в течение 4-5 часов, от вирусов – 43⁰C 7,5 часов, при 45⁰C 4 часа (вирус лейкоза). От многих вирусов помогает пятикратный прогрев яиц по 1-3 часа при ⁰C с последующим охлаждением до 10-12⁰C. Живые вакцины выдерживают при 4⁰C 4 недели.

В настоящее время с целью получения живых вакцин стали искать другую птицу.

Поиск по сайту: