 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
Задание 19. Изучение количественного и качественного состава микрофлоры толстого отдела кишечника
| День | Материал | Ход исследования | Результат |
| Испражнения | Посев на питательные среды в соответствии с прилагаемой схемой исследования на дисбактериоз | ||
| Чашки с посевами | Учет колоний. Изучить количественный и качественный состав микрофлоры кишечника, сделать выводы о дисбактериозе или его отсутствии |
Задание 20. Сделать выводы и заключение по результатам обследованияя на дисбактериоз кишечника (3 день). Назначить биопрепараты для коррекции микрофлоры кишечника (бифидумбактерин, бификол, лактибактерин, колибактерин, молочно-кислые бактерии "Нарине").
Задание 21. Определение антагонистической активности (метод основан на способности микробов-антагонистов выделять в агар антибиотические вещества, которые задерживают рост тестовых культур).
| День | Материал | Ход исследования | Результат |
| Демонстрационные чашки посередине которой широкой полосой засеян микроб-антагонист и перпендикулярно к нему различные тест-микробы | Отметить микроорганизмы, рост которых отступает от полосы, засеянной изучаемым антагонистом |
Дополнительная литература
- Петровская В.Г., Марко Л.П. - Микрофлора человека в норме и патологии.- М.: Медицина, 1986. 287 с.
- Нобл У.К. - Микробиология кожи человека, М.:Медицина, 1986. 457с.
- Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника. М.:Медицина,1989. 204 с.
- Шандала М.Г. Асептика и антисептика: проблемы и решения. - Вестник РАМН. 2000. № 12. С. 6 - 11.
- Коршунов В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.1995. № 3. С. 48 - 55.
- Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А., Афанасьев С.С. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни // ЖМЭИ. 2001. № 5. 47 – 50 с.
ЗАНЯТИЕ 10
ТЕМА: Общая вирусология. Бактериофаги. Применение бактериофагов в медицине
Студент должен знать:
- Принципы универсальной классификации вирусов.
- Понятие о вирионе, ультраструктуре.
- Методы культивирования вирусов.
- Морфологию и ультраструктуру фагов. Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой, практическое применение фага.
Уметь:
- Идентифицировать микробы с помощью фага.
- Определить фаговар, выделять бактериофаги из объектов.
Вопросы для проверки исходного уровня знаний
1. Классификация вирусов. Понятие о вирионе.
2. Природа и свойства бактериофагов (фагов), особенности химического состава. Основные морфологические группы фагов. Анатомическое строение Т-четного фага.
3. Вирулентные фаги, стадии их взаимодействия с бактериальными клетками (продуктивная инфекция). Кривая одиночного цикла размножения фага.
4. Умеренные фаги, особенности их взаимодействия с бактериальной клеткой. Профаг, явление лизогении. Фаговая конверсия.
5. Выделение фага из окружающей среды. Определение титра фага методом Грациа.
6. Практическое применение фага: фагодиагностика, фаготипирование, фагопрофилактика и терапия.
Самостоятельная работа студентов
Задание 22. Рассмотреть чашки с «негативными» колониями вирулентных и умеренных фагов, отметить их отличия.
Методические указания к выполнению работы
| 1. Бактериофаги - вирусы бактерий, способные в них размножаться - продуцироваться, при этом бактериальные клетки лизируются. Такой тип взаимодействия с клеткой (продуктивная инфекция) характерен для вирулентных фагов. Умеренные фаги - способны не только репродуцироваться в бактериальных клетках и вызывать их лизис, но и переходить в скрытое состояние (профаг), при этом бактерии остаются жизнеспособными и становятся лизогенными. Рассмотреть на таблицах и электронограммах различные морфологические типы фагов, изучить анатомические строение Т-четного фага, зарисовать схему строения, отметив детали анатомической структуры. |
| 2. Выделения бактериофага из испражнений, сточной воды, почвы. Иследуемый материал вносят в МПБ. Инкубируют в термостате (иногда добавляют те бактерии, к которым хотят выделить фаг), затем освобождаются от бактерий фильтрованием. Фильтрат засевают на чашки с агаром совместно с бактериями (к которым хотят получить фаг) и через сутки инкубации при 37 С0 наблюдают на фоне роста культуры стерильные пятна – «негативные» колонии фага. |
| 3. Метод агаровых слоев Грациа. Является точным методом титрования бактериофага и незаменим в работе с фагами. Титром фага называется количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага. Испытуемый фаг и бактериальные клетки смешивают в пробирке с расплавленным 0,7% агаром, смесь выливают в чашку с МПА, она застывает в виде второго верхнего слоя. После инкубации в термостате в этом слое размножаются бактерии, давая сплошной, равномерный рост. На месте попадания фаговых частиц происходит гнездный лизис и образуются «негативные» колонии. Количество образовавшихся «негативных» колоний соответствует количеству фаговых частиц, внесенных в слой агара, что дает возможность подсчитать титр фага. Приготовление разведение фага (10-10). 0,7% агар (45-50 С0). + 0,1 мл бактериальной культуры. Учет: на чашке с разведением 10 образовалось 150 «негативных» колоний. Титр - 150х10 = 1,5х10, т.е. такое количество фаговых частиц содержится в 1 мл фага. Определить титр фага по готовым чашкам путем подсчета «негативных» колоний и умножения на указанное разведение. |
| 4 ). Фаготипирование применяется для определения фаговара внутри идентифицируемого вида бактерий. Метод имеет существенное значение при дифференциации брюшнотифозных бактерий, стафилококков; он позволяет установить источник инфицирования. Отметить результаты фаготипирования: а) стафилококков набором типовых фагов; б) брюшнотифозных бактерий - Vi-фагами. Опыт ставился следующим образом: чашки с МПА по дну расчерчены на квадраты по числу использованных типовых фагов. Испытуемая культура засеяна на поверхность МПА газоном. На квадраты, соответствующие наименованиям, нанесены капли типовых фагов. Чашки выдерживают в термостате в течение 24 часов. На месте действия определенного бактериофага образовались пятна лизиса. Обозначения типовых фагов, давших лизис, соответствуют наименованию фаговара. Например, изучаемая стафилококковая культура лизировалась фагами 29, 77 и 80. Фаговар = 29/77/80. Брюшнотифозные культуры подвергаются фаготипированию только тогда, когда они лизируются Vi- фагом. Он наносится на центральный квадрат чашки, засеянной изучаемой культурой. Типовые фаги В, С, Д и др. наносятся на квадраты вокруг центрального. Фаговар брюшнотифозных бактерий записывается по фагу, вызвавшему лизис. Рассмотреть демонстрацию лечебно-профилактических препаратов бактериофага. Примеры препаратов занести в альбом. |
Поиск по сайту: