ВОЗБУДИТЕЛИ ШИГЕЛЛЕЗОВ

Возбудителями шигеллезов являются — S. dysenteriae -(10 се-роваров), S. flexneri (13 сероваров), S. boydii (15 сероваров), S. sonnei — всего 39 номенклатурных единиц.

Морфология. Шигеллы имеют форму палочек с закругленны­ми концами длиной 2—3 мкм и шириной 0,4—0,7 мкм, лишены капсул и жгутиков, спор не образуют. Некоторые представители шигелл снабжены поверхностными образованиями — фимбриями или ресничками.

Тинкториальные свойства. Хорошо окрашиваются анилиновы­ми красителями, грамотрицательны.

Культуральные свойства. Растут на простых питательных сре­дах при 37°' С, могут размножаться в аэробных условиях.

На плотных диагностических средах растут в виде мелких Круглых, слегка выпуклых с ровными краями бесцветных колоний.

Па селективных средах или питательном агаре-образуют два типа колоний: 1 фаза — небольшие гладкие правильной формы колонии; 2 фаза — крупные плоские колонии с неровными края­ми, напоминающие гроздья винограда.

При росте в бульоне гладкие (S) формы образуют равномерное помутнение, шероховатые (R) вызывают образование осадка, надосадочная жидкость остается прозрачной, иногда на поверхности бульона образуется пленка.

Ферментативные свойства. Представители рода обладают малой биохимической активностью: не образуют сероводорода, не гидролизуют мочевину, не утилизируют малонат натрия, цитрат в среде Симонсона, не продуцируют ацетоин, определяемый в реак­ции Фогес-Проскауэра, не обладают фенилаланиндезаминазой, ли-зиндекарбоксилазой, желатиназой, не вызывают щелочения среды Кристенсена, не ферментируют адонит и инозит. В отношении дру­гих признаков могут быть отклонения. Некоторые из биохимических свойств шигелл рекомендованы для дифференциации видов (таб­лица).Токсинообразование. Шигеллы способны продуцировать экзо­токсины. Среди них — энтеротоксины (термолабильный и термо­стабильный), усиливающие секрецию жидкостей и солей в просвет кишки, и цитотоксин, повреждающий мембраны эпителиальных клеток. Бактерии Григорьева-Шига продуцируют сильнодейству­ющий нейротоксин. Все шигеллы при своем разрушении выделяют эндотоксин, с которым связано развитие интоксикационного синд­рома. Повреждающее действие шигелл усиливается их способ­ностью выделять гиалуронидазу, плазмокоагулазу, каталазу, фиб-ринолизин, гемолизин, некротоксин.

Антигенная структура. Шигеллы обладают О- и К-антигенами.

Патогенность для животных. В условиях питомника к шигел-лам восприимчивы обезьяны. При парентеральном заражении кроликов у них развивается интоксикация, заканчивающаяся ле­тальным исходом.

Патогенез. Источником возбудителей являются больные острой или хронической формой дизентерии, реконвалесценты и бактерионосители. Передача возбудителя осуществляется алимен­тарным путем. Шигеллы могут вызывать процесс, который условно можно разделить на 2 фазы.

Первая фаза характеризуется инвазией микробов в цитоплаз­му энтероцитов, некоторые достигают собственного слоя слизистой оболочки. Размножаясь, шигеллы продуцируют энтеро- и цитотоксины, при разрушении микробов освобождается эндотоксин. Экзотоксин и белковая часть эндотоксина обладают нейротропным действием. Липополисахаридный компонент эндотоксина вызывает состояние общей интоксикации организма. Обладая эптеротропностью, эндотоксин оказывает повреждающее действие на энтероциты, стимулируя выход биологически активных веществ (гистамин, ацетилхолин, серотонин), что приводит к нарушению капиллярного кровообращения слизистой оболочки кишки, усугуб­ляет расстройство двигательной, секреторной и всасывательной функцией кишечника. Угнетение ферментативно-окислительных про­цессов, нарушение водно-солевого, белкового и других видов обменов приводит к развитию ацидоза и накоплению в организме токсических продуктов. В результате развиваются тяжелые токсикозы. Повышение секреции жидкости в просвет тонкой кишки определяет развитие диарейного синдрома. Через 1—3 дня тонкая кишка при благоприятном течении болезни освобождается от бак­терий, и процесс локализуется в толстой кишке.

Вторая фаза. Благодаря наличию ферментов, способных раз­рушать слизистую кишечника (муциназа, гиалуронидаза) и дисбактериозу кишечника, шигеллы проникают в эпителиальные клетки и в них размножаются. Это приводит к дегенеративным изменениям эпителиальных клеток, их слущиванию, частичному или полному разрушению. Уменьшается количество бокаловидных клеток.. Основная масса шигелл задерживается фагоцитирующими клетками на уровне базальных мембран, и лишь незначительная их часть может распространяться в подслизистую оболочку и брыжеечные лимфатические узлы. Основное значение и патогенезе дизентерии играют экзо- и эндотоксины, обусловливая весь симптомокомплекс заболевания. Клинически это проявляется синдро­мом интоксикации и нарушением всех видов обмена.

Из организма больного возбудитель выделяется с испражне­ниями.

Профилактика. Специфическая вакцина не разработана.

1. Особенности диагностики инфекций, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и шигеллами.

Эшерихии.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследо­вания служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь (при сепсисе).

Микроскопический этап. Для ускоренной идентификации патогенных типов кишечных палочек применяется метод иммуно-флуоресценции с использованием группоспецифических меченых сывороток.

Бактериологический этап. Исследуемый материал засевают на чашки со средой Эндо и Плоскирева, кровь сеют для обога­щения в бульон, а затем высевают на чашки с МПА. Через 24 часа инкубации при 37° С выбирают колонии малинового цвета с фиолетовым оттенком. Принадлежность к ЭПКП устанав­ливают с помощью РА на стекле со смесью сывороток ОВ-коли. Исследуют не менее 10 колоний с каждой чашки. При положи­тельном результате РА оставшуюся часть колоний пересевают на скошенный агар и короткий пестрый ряд или на среду Рессела. Полученную культуру идентифицируют на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств.

Биологический этап. Не применяется.

Серологический этап. Заключается в выявлении антител к эн-теропатогенным кишечным палочкам (РНГА). Наличие О-антител позволяет отличить острый инфекционный процесс от бактерио­носительства.

Аллергологический этап. Не применяется.

Сальмонеллы.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследо­вания служат кровь, желчь, моча, испражнения, отделяемое розеол, в отдельных случаях — пунктат костного мозга, спинно­мозговая жидкость, гной из септических очагов, некротизирован-ные ткани.

Микроскопический этап. Применяется прямая и непрямая РИФ для| обнаружения салмонелл в инфекционном материале.

Бактериологический этап. Выделение тифозных и паратифоз­ных бактерий проводят по одной и той же схеме, какой бы исходный материал ни исследовался. Различия заключаются в пер­вичном его посеве.

Исследование крови ( 1—2-я недели заболевания, выделение гемокультуры). Кровь в количестве 5—10 мл берут стерильно из локтевой вены больного и засевают в 50—100 мл питательной желчной среды Рапопорт. Из сред накопления материал засевают на скошенный агар или в среду Олькеницкого, а также в чашки со средой Эндо и Плоскирева. Через 18—24 часа изучают посевы, определяют чистоту культуры и идентифицируют ее.

Исследование испражнений (выделение копрокультуры, начи­ная со 2—3-й недели заболевания). Посев испражнений произво­дят параллельно двумя способами — прямым и на среды обо­гащения.

Прямой метод — одну каплю приготовленного материала засевают на чашки со средами Плоскирева, Левина, висмут-суль­фит агар.

Посев на среды обогащения — при посеве кусочек испраж­нений эмульгируют в 10 мл среды Мюллера, Кауфмана или; селенитового бульона. Из этих сред делают высев на чашки со средой Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар через 5—6 часов.

Исследование мочи (выделение уринокультуры с конца 2-й недели заболевания). В моче бактерии находятся практически и чистой культуре и в большом количестве. Посев мочи произво­дят на среды, применяемые для выделения их из испражнений.

Исследование желчи (дуоденальное содержимое, в течение всего срока заболевания). Каждую порцию желчи сеют отдельно, материал в количестве 0,5 мл наносят на среды Плоскирева, Левина, висмут-сульфит — агар в чашки Петри и растирают шпателем.

Обнаружение микробов в крови всегда является показателем острого заболевания, признаком, абсолютно подтверждающим диагноз брюшного тифа. Наличие возбудителя в фекалиях может бытьрезультатом заболевания или бактерионосительства.

Для выделения чистой культуры отмечают типичные или по­дозрительные колонии, пересевают их на комбинированные среды ( средаОлькеницкого, Рессела, в случае их отсутствия — на ко­роткий, пестрый ряд: в пробирки со скошенным агаром и средами Гисса с лактозой и глюкозой). Посевы инкубируют 24 часа при 37° С. На среде Олькеницкого салмонеллы брюшного тифа фер­ментируют глюкозу с образованием кислоты (пожелтение столбика агара), не расщепляют лактозу (окраска скошенной части не из­меняется) и продуцируют сероводород (почернение среды на границе столбика агара и скошенной поверхности).

Салмонеллы паратифов ферментируют глюкозу с образова­нием кислоты и газа (пожелтение и разрыв столбика агара). Полученную чистую культуру идентифицируют по морфологиче­ским, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антиген­ным свойствам и в реакции фаголизиса.

Со скошенного агара делают мазок, окрашивают по Граму, определяют подвижность культуры.

Выделенную культуру сеют в ММТ (мультимикротест-система), которая содержит блок готовых диагностических сред для полного изучения биохимической активности микробов.

Определение антигенной структуры проводят при помощи монорецепторных сывороток: по антигенной формуле устанавли­вают принадлежность выделенной культуры к определенному сероварианту. Анализ антигенной структуры начинают с выявления О-антигена с помощью монорецепторных О-сывороток (1), 2, 4, О, 9 групп А, В, С, Д (по Кауфману). Если в одной из капель реакция агглютинации положительна, дальнейшее определение видаведется смонорецепторными Н-сыворотками специфической фазыв пределах установленной группы.

Если культура типична по биологической характеристике и обладает антигенным составом, соответствующим определенной

серологической группе и серовару, то можно считать идентифи­кацию законченной.

Определение фаговара имеет большое значение при эпиде­миологических обследованиях и помогает выявить источник ин­фекций.

Брюшнотифозные палочки, содержащие Vi-антиген, лизиру-ются Vi-бактериофагом. Vi-фаг 1-го варианта является общим для всех тифозных бактерий, обладающих Vi-антигеном. Vi-фаги 2-го варианта являются различными, и при их помощи можно опре­делить фаговар брюшнотифозной палочки. Применяют набор Vi-фагов 2-го варианта — А, В, С, D, E, F и т. д.

Для определения фаговара тифозные палочки должны быть в V-форме, т. е. содержать Vi-антиген и агглютинироваться Vi-сы-вороткой; они не должны агглютинироваться О-сывороткой. Для опыта применяют молодые 3—4-часовые бульонные культуры, которые высевают на чашки с агаром. Употребляют 1,3% про­зрачный агар рН 7,2—7,4. Чашки с агаром хорошо подсушивают и на поверхность их наносят полоску шириной 5—6 мм из испы­туемой культуры фага, после чего чашку снова ставят в термостат на 20—30 мин для подсушивания. Засеянные чашки помещают в термостат на 2—3 часа, а затем на ночь в холодильник при 2—6° С. На следующий день чашки помещают вновь на 5—6 ча­сов в термостат, лишь после этого учитывают результаты опыта. Фаговар культуры определяют по фагу, который полностью лизирует культуру.

Для определения фаговаров салмонелл паратифа В исполь­зуют набор из 15 фагов, вариант определяют по таблице.

Биологический этап не применяется.

Серологический этап. Используемая ранее РА Видаля для обнаружения О-антител в крови больного в настоящее время не находит широкого применения и вытеснена более чувствитель­ной РНГА с эритроцитарными диагностикумами (О-, Н-, Vi-).

Для дифференциации бактерионосителей от вакцинированных применяют определение класса антител (IgM, IgG).

Аллергологический этап не применяется.

Шигеллы.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследо­вания служат испражнения больных, реконвалесцептов, носителей; реже — рвотные массы и промывные воды желудка и кишок, в летальных случаях используют кусочки органов.

Микроскопический этап. В качестве экспресс-диагностики эпи­демических вспышек дизентерии используется метод флюоресци­рующих антител (РИФ).

Бактериологический этап. Материал засевают на среды Левина, Плоскирева, с красным конго по Либерману, с бромкрезоловым пурпурным. Полученную культуру испытывают в РА на предметном стекле с адсорбированными сыворотками, сначала — с поливалентными сыворотками или смесью моносывороток, а за­тем — с каждой из входящих в состав той, с которой получен положительный результат. В случае обнаружения палочки вида Флекснера или Бойда устанавливают серовар или подсеровар при помощи адсорбированных сывороток. Подсеровар шигелл Флекс­нера определяют по антигенной формуле. Шигеллы Зонне иденти­фицируют по колициногенности. У шигелл Зонне установлено 17 колициногенных вариантов (колициногеноваров). С целью подтверждения принадлежности к шигеллам определяют способность культур лизироваться поливалентным дизентерийным фагом.

Биологический этап. Одним из надежных тестов, устанавлива­ющих принадлежность культуры к шигеллам, является керато-конъюнктивальная проба. Ее проводят на морских свинках, кото­рым в конъюнктивальный мешок вводят петлю суточной агаровой культуры или каплю бульона. Свежевыделенные шигеллы вызы­вают выраженный кератит. Помутнение или изъязвление роговицы наступает на 2—5-е сутки после введения культуры в глаз.

Серологический этап. Используется РИГА. Положительные ответы могут быть получены уже с 5-го дня болезни.

Аллергологический этап. Не применяется.

1. Особенности иммунитета при кишечных инфекциях, индуцированного Т-независимыми антигенами.

1. Токсические инфекции. Особенности их этиологии, патогенеза и диагностики.

Пищевые токсикоинфекции - группа острых бактериальных кишечных инфекций и интоксикаций, обусловленных употреблением в пищу продуктов, инфицированных (контаминированных) патогенными и условно-патогенными МБ, в которых они размножились и накопились их токсины.

Этиология: условно-патогенные микробы, способные продуцировать экзотоксин, а при разрушении выделять эндотоксин (обыкновенный протей, клебсиелла, энтеропатогенные кишечные палочки и др.)

Клиника: 2 синдрома - гастроэнтеритический и общей инфекционной интоксикации.

а) синдром острого гастрита - характеризуется периодическими болями и чувством тяжести в эпигастральной области, тошнотой, повторной рвотой; при глубокой пальпации отмечается болезненность в эпигастрии

б) синдром острого энтерита - выражается урчанием, периодическими схваткообразными болями по всему животу, обильным жидким стулом; испражнения водянистые, с комочками непереваренной пищи, часто пенистые, имеют светлую желтоватую или желтовато-зеленоватую окраску; при пальпации живота выявляется урчание, шум плеска, болезненность в проекции тонкой кишки, толстая кишка не изменена; следствием энтерита является обезвоживание

в) синдром острого колита - проявляется периодическими схваткообразными болями в нижней части живота, чаще в левой подвздошной области, ложными позывами на дефекацию, тенезмами, ощущением неполного освобождения кишечника после дефекации; стул частый, скудный, при тяжелом патологическом процессе - некаловый, состоящий из одних продуктов воспаления толстой кишки - слизи, крови; пальпаторно спазм, уплотнение и болезненность пораженных отделов толстой кишки; может развиться инфекционно-токсический шок или инфекционно-токсическая энцефалопатия.

г) общеинфекционный синдром - головная боль, общая слабость, головокружение, познабливание или ознобы с повышением температуры тела от субфебрильной до фебрильной.

Диагностика: связь с употреблением недоброкачественного пищевого продукта, короткий инкубационный период, острое начало, синдромы острого гастрита, гастроэнтерита, гастроэнтероколита. Для установления этиологии токсикоинфекции проводят бактериологическое исследование испражнений с целью выявления патогенных энтеробактерий (ректальные мазки берут в приемном покое и в отделении, посев на питательные среды и идентификация производится в бактериологической лаборатории), выявляют антигены возбудителей в биологических жидкостях больного (кровь, испражнения, моча, слюна) и на объектах внешней среды (иммуноферментный метод, метод флуоресцирующих антител, реакция коагглютинации, реакция иммунодиффузии в агаре, реакция торможения пассивной гемагглютинации, полимеразная цепная реакция).

2. Возбудители дифтерии, таксономическое положение, биологические свойства.

Поиск по сайту: