ТЕМА 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать общее представление о микрофлоре воды, о путях загрязнения, овладеть методами ее исследования.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробы воды: водопроводная и речная; чашки Петри, в пробирках – расплавленный МПА (столбиком), стерильные пипетки на 1 мл, стерильный физиологический раствор по 9 мл.

Для демонстрации – прибор Зейтца, водоструйный вакуумный насос, мембранные фильтры (№ 3), среда Эндо в чашках; глюкозо-пептонная или лактозо-пептонные среды с индикатором и поплавками, разлитые по колбам и пробиркам. Для определения коли-титра методом бродильных проб заранее делаются посевы воды для получения отрицательных и положительных результатов.

Вода является естественной средой обитания многих микроорганизмов. Особую опасность для здоровья человека и животных представляют патогенные бактерии, которые могут попадать в питьевую воду.

Источниками загрязнения воды патогенными микроорганизмами являются выделения больных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно предприятий, перерабатывающих животное сырье и др. Длительность выживания патогенных микробов в воде зависит от их свойств, времени года, наличия питательных веществ и может составлять от нескольких часов до нескольких лет. Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в воде до 3 лет, бруцеллы до 100 дней, возбудитель туберкулеза до 1 года.

Имеется группа болезней, для которых характерен водный путь распространения (паратифы, лептоспирозы и др.).

Таким образом, вода может стать источником распространения инфекционных болезней и возникновения эпизоотии.

Для санитарно-бактериологической оценки воды проводят следующие исследования:

1) определение общего количества микробов (ОМЧ);

2) Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);

3) Обнаружение в воде патогенных микроорганизмов.

При санитарно-бактериологических исследованиях пробы воды забирают не менее 0,5 л. Из открытых водоисточников пробу отбирают батометром (рис. 52). Батометр – стерильная емкость с пробкой, в металлическом каркасе и свинцовым грузилом. На нужной глубине пробку открывают, потягивая ее за веревочку. После поднятия батометра пробку заменяют на ватную. Воду из рек, озер отбирают с глубины 10-15 см от поверхности, а при небольшой глубине на расстоянии 10-15 см от дна.

Для отбора проб воды из кранов водопровода используют стерильные колбы на 0,5 л с ватной пробкой. Кран перед забором пробы стерилизуют обжиганием горящим спиртовым тампоном, затем в течение 10 мин спускают воду при полном открытии крана. Пробы воды исследуют тотчас же или не позднее 2 ч с момента взятия. Если это невозможно, то хранят не более 6 ч при 1-5 ^СС.

Определение общего количества микробов (ОМЧ) в воде. При определении ОМЧ в водопроводной воде производят посев без разведения, внося 1 мл ее в стерильную чашку Петри. При исследовании воду открытых водоемов, сточных вод предварительно разводят стерильной водопроводной водой в зависимости от предполагаемого загрязнения: от 1:10^-1 до 1:10^-4, так же вносят из последних разведений по 1 мл в стерильные чашки Петри.

Посевной материал заливают расплавленным и охлажденным до 45°С МПА и после застывания инкубируют в термостате при 37°С 24 ч. После этого срока проводится подсчет выросших колоний и методом расчета определяется общее количество микробов в 1 мл исследуемой воды.

Рис. 52. Батометр – аппарат для взятия проб воды из открытых источников

Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ) воды

Коли-титром воды называют наименьший ее объем, в котором обнаружены бактерии группы кишечной палочки (БГКП).

Коли-индекс показывает число БГКП в 1 литре воды.

Показатель БГКП указывает на санитарное состояние воды, пригодной в качестве питьевой. Это показатель калового загрязнения воды, так как эти бактерии попадают в воду с калом животных и человека. При большом содержании БГКП в воде создается потенциальная угроза попадания в нее и патогенных бактерий, которые могут вызвать у человека и животных инфекционные болезни.

Определение БГКП осуществляется двумя методами:

1. Метод бродильных проб.

2. Метод мембранных фильтров.

Метод бродильных проб

Этот метод основан на определении сахаролитической активности БГКП. Исследуемая вода в определенных объемах засевается на глюкозо-пептонную среду (ГПС) или лактозо-пептонную среду (ЛПС) с поплавками и индикатором.

Водопроводную воду для определения КТ засевают в объеме 333 мл (три объема по 100 мл, три – по 10 мл и три объема по 1 мл) во флаконы (колбы). При этом вода в объемах 100 и 10 мл засевается во флаконы и пробирки с 10 и 1 мл концентрированной среды, а 1 мл – в пробирки с 10 мл среды нормальной концентрации.

Сточные воды для исследования засевают в объемах: 1; 0,1; 0,01 и 0,001 в пробирки с 10 мл среды нормальной концентрации.

Посевы инкубируют в термостате 24 часа при 37°С.

При отсутствии БГКП образование кислоты и газа не происходит (помутнение может быть).

Рост БГКП сопровождается помутнением, образованием газа и изменением цвета среды (красный цвет переходит в желтый). Из подозрительных флаконов и пробирок на БГКП проводят посев на агар Эндо. Посевы инкубируют при 37°С 24 часа. При отсутствии роста на агаре Эндо или при наличии колоний, не характерных для БГКП,дается отрицательный ответ.

Из колоний, характерных для бактерий БГКП (ярко-красные с металлическим оттенком), готовят мазки с окраской по Граму. Изучают культуру по оксидазному тесту – фильтровальную бумагу смачивают раствором нафтола-диэтил-фенилендиамина и на нее наносят штрихом снятые 2-3 колонии с агара Эндо.

Для кишечной палочки характерно: наличие грамотрицательных палочек в препарате (мазке) и отсутствие изменений в окраске индикаторной бумажки (отрицательная реакция на оксидазу).

Бактериологические показатели для питьевой (водопроводной воды, подвергнутой очистке и дезинфекции):

- общее микробное число – не более 100;

- коли-титр – не менее 300;

- коли-индекс не должен превышать 3.

Вода артезианских скважин должна соответствовать следующим нормам: общее микробное число – не более 100, коли-титр – не менее 500, коли-индекс – не более 2.

Вода открытых водоемов считается доброкачественной, если общее микробное число – не более 1000, коли-титр – не менее 111, коли-индекс – не более 9.

Метод мембранных фильтров

Определение коли-индекса воды проводят методом концентрации бактерий из определенного ее количества на мембранных фильтрах и с последующим их наложением на плотные питательные среды. На поверхности фильтра вырастают колонии, которые поддаются количественному учету.

Мембранные фильтры изготовляют из нитроцеллюлозы с различными по размеру порами.

Для исследования воды используют фильтр № 3, который на своей поверхности задерживает БГКП.

Перед началом работы мембранные фильтры стерилизуют кипячением в дистиллированной воде в течение 10-15 мин.

Фильтр осторожно матовой поверхностью вверх накладывают на сетку фильтрационного прибора типа Зейтца, который предварительно должен быть простерилизован фламбированием.

В воронку наливают нужное количество воды и в приемной колбе создается вакуум при помощи водоструйного или другого насоса. Исследуемая вода просачивается через пластинку мембранного фильтра, а бактерии, находящиеся в ней, остаются на поверхности фильтра. По окончании фильтрации верхнюю часть прибора снимают, мембранный фильтр матовой стороной вверх переносят стерильным пинцетом на поверхность агара Эндо в чашках. Чашки крышками вниз помещают в термостат при 37°С на 18-24 ч.

Через поры мембранного фильтра происходит диффузия растворимых частей среды Эндо; вследствие этого на поверхности фильтра вырастают типичные колонии для БГКП — ярко-красные с металлическим оттенком.

По числу выросших колоний определяют количество кишечных палочек в 1 л воды и тем самым устанавливают коли-индекс.

Водопроводная вода исследуется в количестве 333 мл, т.е. она пропускается последовательно через четыре фильтра в объемах 3, 30, 100 и 200 мл.

Установление наличия в воде патогенных бактерий осуществляется путем посева на дифференциально-диагностические и элективные питательные среды с последующей их идентификацией методами, принятыми в микробиологии.

Поиск по сайту: