Бактериологическая диагностика при стафило-, стрептококковой, синегнойной, шигеллезной инфекциях

бакскопич-мазки, бактериологичич-посевы.

В 2этапа

1-выдел-е в чист культ

2-идентификация

1 день-мазок окраска по Грамму-тинкториальн и морфол св-ва.Посев на пит среду

2день-описание культ св-в(высота, величина,цвет, пов-ть,прозр, края, консистенция),Приготовл мазка из чист колоний Накопление ч. культ на скош агаре

3день-описание хар-ра роста чист культ. Посев на пестр ряд

4день-учет биохим св-в и заключение

Это информативный метод, чувств, опред чувств к антибиот, но долго и дорого

Синегнойная палочка-при сепсисе беру материал из раны, при гангрене из раны, мазок по грамму –палочка, на среде накопленя-мясо-пептонном агаре, образуются колонии малоактивные, плохо ферментируют глюкозу, хорошо-белки, есть пигмент пиоцианин темно синий, имеется запах земляничного мыла, облигатный аэроб, гемолизин-растворяет эритроциты, желатиназа, лецитиназа, экзотоксин А, патогенность обусловлена слизью капсулоподобного в-ва защищающего от фагоцитоза, чувствителен к антибиотикам. Шигеллы –на среду Плоскирева(желчные кислоты,лактоза и индикатор) шигеллы образуют мелкие, прозрачные, бесцветные колонны. Шигеллы Зонне могут давать колонны двух видов: одни плосковатые с зазубренными краями, другие - круглые, выпуклые, с влажным блеском., гр- палочки, ферментирует манит, глюкозу и сахарозу-шигеллозоны, дифференцирует на роды. Стафилококки –В общем виде схема выглядит следующим образом. Проводят бактериоскопию, выявляя грамположительные кокки в виде гроздей винограда (стафилококки). Высевают материал на простые питательные среды. Подозрительные колонии отбируют и пересевают для изучения на дифференциальные среды - на кровяной агар (гемолиз), молочно - солевой и молочно - желточно - солевой агары (за счет NaCl угнетается рост посторонней микрофлоры, использование сред позволяет лучше выявить пигмент и лецитиназу). Выделенную культуру идентифицируют по видовым признакам, определяют наличие золотистого пигмента, плазмокоагулазную активность, сбраживание маннита, гемолиз, чувствительность к антибиотикам, проводят фаготипирование. бывают коагулазо+(St. aureus) и –(St. Hominis intermedius haemolyticus). есть капсула, белок А-против фагоцитоза, лейкоцидин-уничтожает макрофагов, гемолизин- альфа и бета активность, энтеротоксин-вызывают, плазмокоагулаза-сгусток вокруг микроба, лецитиназа- расщепляют лецитин оболочки эритроцитов, гиалуронидаза-действует на соединительные ткани, фибринолизин- лизирует сгусток плазмы. Определяют видовую принадлежность, для ауреус –плазмокуагулазу, гемолизин, А-протеин.Стрептококки –Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из материала, взятого из коло­ний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитиче-ские 3) β-гемолитические, образующие вокруг колонии пол­ностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.гной, слизь из зева, моча- окраска по грамму, посев на кровяной агар, классифицруют по отутствию или наличию гемолиза, идентификация по Аг св-вам в р-и преципитации к серотипам A B D, при подозрении на сепсис посевы крови. Серологическое исследование для подтверждения ревматизма- определяют наличие ат к О-стрептолизину в РСК или преципитеции, а также С-реактивного белка.

Микроскопический метод диагностики при менингококковой, гонорейной инфекции, туберкулезе, при гнойно-воспалит заболеваниях (клебсиелла, синегнойная палочка, протей, кишечная палочка)

Менингит- спинно-мозовая жидкость или слизь из носоглотки при обследовании на бактерионосительство, кровь-сепсис, органы умерших от инфекции. Материал нужно как можно быстрее на исследование т.к. менингококки лабильны. Спинно-мозг жидкость –2 мазка из жидкисти со дна при стоянии, 1-метилен синим-2 по грамму. По грамму не красится,метилен. синим-гр-диплококки, неподвижны, не имеет спор, не образует капсул. Экспресс-методом диагностики может быть микроскопия толстой капли крови. В мазках обнаруживают грам отрицательные кокки, расположенные
преимущественно внутри нейтрофилов,Гонорея-Гонококк при микроскопическом исследовании представляет собой парно расположенный кокк (диплококк), при окраске по Грамму - отрицательный. Возбудитель гонореи имеет длину от 1,3 до 1,6 мкм, поэтому достаточно хорошо просматривается в световой микроскоп с иммерсией.
Гонококки располагаются, как правило, группами, внутри различных клеток: лейкоцитов, эпителиоцитов. Гонококк может располагаться внутри других более крупных бактериальных клеток (трихомонад). Гонококк имеет трехслойную наружную мембрану, которая содержит различные протеины (белки). отделяемое уретры, метиленоаой синью и по грамму.гр- диплококки внутри лейкоцитов. Туберкулез- Микроскопическая диагностика включает микроскопию нативного материала, использование методов накопления, люминесцентную диагностику. Микроскопия нативного патологического материала (мокрота, отделяемое свищей, промывные воды из бронхов, моча) в мазках, окрашенных по Цилю - Нильсену, позволяет выявлять красные кислотоустойчивые палочки при концентрации микобактерий не менее нескольких сот тысяч / мл. Методы накопления (например, флотации) повышают чувствительность микроскопии до нескольких тысяч микробных тел / мл. Люминесцентная микроскопия с использованием акридинового оранжевого или аурамина - родамина - наиболее чувствительный и эффективный метод бактериоскопии, чувствительность - 500-1000 микобактерий / мл. Позволяет выявлять микобактерии с измененными культуральными и тинкториальными свойствами.1)микроскопия-DS не ставится на его основании и даже при обнаружении в материале нужен рентген, только в случае открытой формы обнаружат. Делают микроскопию, но при количестве в 1мл 10 в 5 степени не обнаружится этим методом. Использую р-ю гомогенизации т.е. с помощью 1% едкого натра. Р-ю флотации после гомогензации прогревают 30 мин температура-55, добавляют дистиллированную воду, встяхивают, отстаивают и исследуют всплывший материал красят по цилю-нильсену. 2)бактериологический-на среде Ленштейна-Енсена рост от 3 нед до 3 мес. Колонии сухие, морщинистые, изучают биохим св-ва. 3) биологический метод-заражают материалом морских свинок т.к. они восприимчивы к 1 туб. палочке.4) иммуноферментный анализ. 5) генетические методы-ЦПД и ДНК-зондирование. Гнойно-воспалит. –красятпо грамму.Клебсиелла-прямые неподвижные палочки. Синегнойная палочка-грамотрицательная подвижная палочка. Протей-! Кишечная палочка-На жидких средах E.coli дает диффузное помутнение, на плотных средах образует S- и R- формы колоний. На основной для эшерихий среде Эндо лактозоферментирующие кишечные палочки образуют интенсивно красные колонии с металлическим блеском, не ферментирующие - бледно- розовые или бесцветные колонии с более темным центром, на среде Плоскирева - красные с желтоватым оттенком, на среде Левина - темно- синие с металлическим блеском.

Поиск по сайту: