Бактериологическое исследование. Для выделения гемокультуры из локтевой вены берут 10-20 мл крови и поровну засевают в два флакона с печеночным

Для выделения гемокультуры из локтевой вены берут 10-20 мл крови и поровну засевают в два флакона с печеночным, сывороточным декстрозных бульоном или МПБ с глюкозой, глицерином и антифаговою сывороткой для подавления бруцеллезного бактериофага. Один флакон инкубируют в обычных аэробных условиях, второй - в атмосфере 10% С02 (для роста В. abortus). Особенностью бруцелл очень медленный рост на средах при выделении от больных, поэтому посевы следует выдерживать в термостате до 4-5 недель, делая висел на элективные Агари каждые 4-5 дней. Наилучшей средой для выращивания бруцелл является сывороточный декстрозных агар (МПА, 5% сыворотки, 1% декстрозы). Для ускорения исследования посевы крови проводят в два прямоугольных флаконы по методу Кастанеды. Флаконы содержат, кроме бульона, еще и слой агара на одной или обеих стенках. Начиная с 4-го дня после посева, флаконы периодически покачивают для того, чтобы оросить бульоном поверхность агара. В случае положительного результата на агаре вырастают колонии бруцелл, которые отсеивают на элективные среды и проводят идентификацию. Если в течение месяца колонии не растут, делают высев из бульона на плотную среду. Получение гемокультуры является одним из основных методов бактериологической диагностики бруцеллеза у людей. Если болезнь вызывает В. melitensis, гемокультура высевается в 65-90% случаев, при заражении В. abortus - в 5-15%. Иногда гемокультура вырастает уже с первых дней лихорадки. Хорошие результаты в острой и хронической стадиях болезни дают посевы пунктатов костного мозга. Миелокультуру удается выделить в 2 раза чаще, чем гемокультуру. Несколько капель аспирата костного мозга засевают в две пробирки с тем же средой. Мочу для выделения уринокультуры и желчь для выделения биликультуры, а также молоко сначала центрифугируют. Из осадка или сливок делают высев по 0,1 -0,2 мл на чашки с агаром "Д", (или печеночным), к которому добавляют генциановый фиолетовый в разведении 1:200 тыс. для задержания роста сопутствующей микрофлоры. Очень эффективны посевы материала в желток куриных жировых (неоплодотворенных) яиц или в желточный мешок куриного эмбриона. Кровь больного или аспират костного мозга разводят бульоном 1:3 и по 0,1-0,2 мл инокуляцию в несколько яиц. Зараженные яйца инкубируют при 37 ° С 5 дней и по 0,5 мл их содержания высевают на жидкие и плотные среды. Рост бруцелл наблюдается уже через 2-3 дня. Если посевной материал (фекалии, моча, мокрота, гной и т.д.) контаминови посторонними микробами, его сначала центрифугируют, осадок разводят генциановый фиолетовым в 3-5 раз и по 0,2 мл вносят в яйца или эмбрионы с последующим посевом на элективные агар. Колонии бруцелл на агаре мелкие (0,1-0,5 мм), круглые, выпуклые, гомогенные с перламутровым оттенком. Бруцеллы могут образовывать как S-, так и R-формы колоний (особенно В. ovis, В. suis и В. canis). С помутневшего бульона и типичных колоний изготовляют мазки, окрашивают по Граму и отсеивают на скошенный агар для выделения чистой культуры. Идентификация культур проводится по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам и на основе реакции агглютинации видовыми и монорецепторными сыворотками. Теперь есть надежные тесты для дифференциации основных видов и биовары бруцелл.

Поиск по сайту: