Различают след. методы постановки р-ции преципитации

Вопрос №2

Р- ия преципитация, ее механизм.

Реакция преципитации относится к числу наиболее простых и ускоренных методо серологического анализа. В основе реакции лежит образвоание видимого осадка, состоящего из вступивших друг с другом в соединение антител и молекулярных антигенов (например, бактериальн. белков или полисахоридов, образовавшихся при разрушении микробных тел).

Р-ция преципитации является качесвенным методом исследования, при котором диагностические значение имеет появление осадка в реагирующих жидкостях.

Р- ию преципитации используют в след. целях:

1. Для выявления специфич антител в исследуемой сыворотке на основе применения определенных антигенов

2. Для обнаружения антигенов белковой или полисахаридной природы с использованием известной, специфической, преципитирующей сыворотки.

Для постановки р-ции преципитирующей необходимо:

1. Сыворотки (исследуемые или иммунные- преципитирующие)

2. Антигены (исследуемые иди диагностические)

3. Изотонический раствор хлорида натрия рH 7,0-7,2

4. Пастеровские пипетки

5. Преципитационные пробирки (диаметром 2-3 мм и высотой 2-3 см для р-ции кольцепреципитации, диаметром 4 мм и высотой 4-6 см для р-ции преципитации по типу флокуляции)

Антигены, применяемые для постановки р-ции преципитации, представлят собой, коллоидные в-ва в состоянии тонкой дисперсности, обязательно должно быть в растворимом состоянии. В качестве антигенов в р-ции приципитации использ фильтраты бульонных культур, экстракты микробных тел, полученные различными способами.

Преципитирующие сыворотки, приготовленные против различных видов микробов, реагируют с антигенами, полученными только от этих видов микробов.

При постановке р-ции преципитации титр преципитирующих сывороток определяют по наибольшому разведению, антигена, при котором еще наблюдается образование преципитата.

Техника постановки р-ции преципитации:

В штатив устанавливают 2 ряда преципитационных пробирок. В пробирках первого ряда готовят несколько последовательных разведений антигена (степень начального и конечного, разведений определяется способом приготовления и активностью антигена). Экстракты микробных культур разводят обычно от 2 до 64 раз.

В каждую пробирку второго параллельного ряда вносят 0,5 мл цельной или разведенной 1:2 преципитирующ сыворотки. Затем разведенный антиген, находящий в пробирках первого ряда, переносят в объем 0,5 мл в соответствующие пробирки второго ряда.

Смесь антигена с сывороткой после тщательного перемешивания ставят на 2 ч в термостат, а затем на 18- 20ч оставляют при комн. Температуре.

В случае положительного результата в прозрачной жидкости образуются хлопья преципитата, оседавшие в виде рыхлого осадка на дно пробирки. Предельное разедение антигена, с которым сыворотка образет преципитат, считается титром сыворотки.

Различают след. методы постановки р-ции преципитации

a. Метод простой диффузии, при котором одно реагирующее в-во(обычно антиген) диффундирует в агар, содержащий постоянную концентрацию др реагирующего в-ва, - иммунную сыворотку

b. Метод двойной диффузии, при котором антиген и антитело, движутся навстречу др другу через нейтральный слой агара.

Вопрос № 3

Поиск по сайту: