Построение градуировочного графика

В пробирки вносят следующие объемы стандартного раствора: 0; 0,25; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 см³, что соответствует массе фенола: 0; 5; 10; 20; 30; 40 мкг. Доводят объем в каждой пробирке до 2,5 см³, добавляя соответствующий объем 50 г/дм³ раствора трихлоруксусной кислоты (2,5; 2,25; 2,0; 1,5; 1,0; 0,5 см³) и перемешивая. В каждую пробирку добавляют 5 см³ 0,5 моль/дм³ раствора гидроокиси натрия, перемешивают, выдерживают 10 мин и добавляют 1,5 см³ реактива Фолина, разведенного дистиллированной водой в соотношении 1: 2 и перемешивают.

Через 30 мин измеряют оптическую плотность растворов по отношению к 50 г/см³ раствору трихлоруксусной кислоты на фотоэлектрическом калориметре с применением светофильтра с 600±10 нм в кювете с расстоянием между рабочими гранями 10 мм или на спектрофотометре при длине волны 600 нм в кювете аналогичного размера.

По полученным средним данным по трем стандартным растворам на миллиметровой бумаге размером 20 х 20 см строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают значение массовой доли фенола (микрограмм в 9 см³ окрашенного раствора); на оси ординат — значение соответствующей оптической плотности (D). Градуировочный график должен проходить через начало координат.

Проведение испытания. От объединенной пробы, подготовленной к испытанию, берут 2 навески массой по 1 г (до третьего десятичного знака) и переносят в две пробирки⁵ (одна — контрольная, другая — опытная).

В пробирки вносят по 10 см³ цитратного буфера рН 6,5, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и настаивают в течение 20 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая.

В контрольную пробирку добавляют 5 см³ 200 г/дм³ раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и добавляют 5 см³ 2 г/дм³ раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют.

В опытную пробирку добавляют 5 см³ 2 г/дм³ раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты и помещают в ультратермостат при температуре (39±1)°С на 1 ч, затем добавляют 5 см³ 200 г/дм³ раствора трихлоруксусной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют.

Для проведения цветной реакции из контрольной и опытной пробирок отбирают по 2,5 см³ безбелкового фильтрата. Цветную реакции проводят по «Построение градуировочного графика».

Массовую долю фенола определяют по градуировочному графику.

Массовую долю фенола (X) в процентах вычисляют по формуле:

Х = (m₁-m₂) х 20 х 100

m х 2,5 х 10 ⁶

где m ₁ — масса фенола в опытной пробирке, найденная по градуировочному графику, мкг;

т₂ — масса фенола в контрольной пробирке, найденная по градуировочному графику, мкг;

m — масса анализируемой пробы, г;

10⁶ — коэффициент пересчета в граммы;

20— разведение, см³;

2,5 — объем фильтрата, отобранный для цветной реакции, см³.

Поиск по сайту: