 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
ОСНОВНЫЕ ФОРМЫ БАКТЕРИЙ
| Формы бактерий | Рисунок | Морфологические и тинкториальные свойства |
| Стрептококк | ||
| Пневмококк | ||
| Стафилококк | ||
| Менингококк, гонококк | ||
| Кишечная палочка | ||
| Бациллы | ||
| Клостридии |
Подпись преподавателя _________________________________________________________
Теоретическая справка
к работе № 2
Структурные компоненты бактериальной клетки, их функции методы выявления:
| Постоянные компоненты | Функции | Метод выявления |
| Клеточная стенка Гр + (пептидогликан, тейхоевые кислоты) Гр – (ЛПС, пептидогликан, фосфолипиды, белки) | 1) скелетная 2) защитная 3) рецепторная 4) антигенная 5) адгезивная 6) транспортная 7) нарушение синтеза клеточной стенки ведет к образованию L-форм | Световая микроскопия, окраска по Граму |
| ЦПМ (цитоплазматическая мембрана - двойной слой фосфолипидов с внедрёнными белками) | 1) основной осмотический барьер 2) участвует в регуляции роста и синтезе компонентов клеточной стенки 3) транспорт питательных веществ в клетку и метаболитов из нее 4) инвагинации участков ЦПМ - мезосомы - содержат ферменты, обеспечивающие биологическое окисление | Электронная микроскопия |
| Мезосомы - производные ЦПМ | 1) аналог митохондрий, обеспечивают синтез АТФ и процессы дыхания 2) участвуют в делении клетки 3) участвуют в спорообразовании | Электронная микроскопия |
| Цитоплазма - сложная коллоидная система, состоит из воды, растворимых белков | Обеспечивает функционирование всех органелл | Электронная микроскопия |
| Рибосомы – коэффициент седиментации 70S | Отвечают за биосинтез белка | Электронная микроскопия |
| Нуклеоид - двунитевая молекула ДНК, замкнута в кольцо, лишена мембраны | Носитель генетической информации, расположен в центральной зоне бактерий (одна хромосома) | Электронная микроскопия |
| Непостоянные компоненты | Функции | Метод выявления |
| Капсула - слизистая структура, прочно связана с клеточной стенкой (полисахариды или полипептиды) | 1) защитная 2) антигенная 3) адгезивная | Световая микроскопия, окраска по Бурри, Бурри-Гинсу |
Жгутики состоят из белка-флагеллина, являющимся Н-антигеном
Пили – состоят из белка
| Обеспечивают движение бактерий Пили 1-го порядка обеспечивают адгезию на поражаемой микробной клетке. Пили 2-го порядка – конъюгационные, обеспечивают перенос части генетического материала от донора к реципиенту | В препаратах «висячая капля», «раздавленная капля», при фазово-контрастной микроскопии Электронная микроскопия |
| Плазмиды - дополнительные факторы наследственности в виде замкнутых колец ДНК с небольшой молекулярной массой | 1) регуляторная – компенсация нарушений метаболизма ДНК клетки хозяина 2) кодирующая – внесение в бактериальную клетку новой генетической информации | Электронная микроскопия |
| Включения - гликоген, полисахариды, бета-оксимасляная кислота, полифосфаты (волютин) и др. | Запас питательных веществ | Световая микроскопия. Волютин выявляют по Лёффлеру или Нейссеру |
| Спора - плотная многослойная оболочка, с большим содержанием кальция и липидов, низким содержанием воды. Образуют некоторые Гр+ палочки, из одной клетки образуется одна спора. | Сохранение генетической информации, при неблагоприятных условиях. Расположение споры: - субтерминальное - терминальное - центральное | Световая микроскопия, окраска по Ожешко. |
Техника приготовления препаратов-мазков, их фиксация и окраска
Для количественного учета, изучения морфологии, выявления спор, капсул, органоидов, включений препарат-мазок необходимо зафиксировать и окрасить.
1 этап. Обезжирить стекло, протерев рабочую поверхность стекла мылом, которое затем удаляют салфеткой.
2 этап. Если микроорганизмы выращены на плотной питательной среде, то на обезжиренное стекло наносят каплю физиологического раствора и в нее вносят петлей небольшое количество материала, который распределяют тонким слоем на поверхности около 2 см2.
3 этап. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют. В процессе фиксации микробные клетки погибают, этим достигается безопасность работы с ними. Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители, чем живые. В фиксированном мазке клетки прикрепляются к стеклу и не смываются при последующей обработке.
Методы фиксации
| Физический метод | Химический метод |
| Фиксация мазка над пламенем спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх | Мазок погружают в фиксатор на определенное время. В качестве фиксатора используют: этанол – 10-15 мин; ацетон – 5 мин; смесь Никифорова (этанол +эфир – 1:1) – 10-15 мин и др. |
Методы окраски
| Простые методы (ориентировочные) | Сложные методы (дифференцирующие) |
| 1. Применяют для изучения морфологии микроорганизмов. 2. Окрашивают одним красителем анилино-вого ряда (основным или кислым): кислый фуксин, метиленовый синий, эозин, генциановый фиолетовый. | 1. Применяют для изучения структуры клеток, дифференциации микроорганизмов. 2. Используют несколько красителей. Окраска по методу: Грама, Циля-Нильсена, Ожешко, Романовского-Гимза, Нейссера Гинса-Бурри и др. |
Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители. Краситель наливают на поверхность мазка на определенное время, затем мазок промывают до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными, осторожно высушивают фильтровальной бумагой. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения абсолютно прозрачно, а клетки микробов интенсивно окрашены.
Окраска по Граму. Сущность метода
Метод основан на способности микроорганизмов удерживать образующийся при окраске комплекс генцианового фиолетового и йода. Это связано с особенностями строения и химического состава грамположительных и грамотрицательных бактерий. У грамположительных бактерий на поверхности клеток есть магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, которые прочно связывают комплекс генцианового фиолетового с йодом и препятствуют его вымыванию спиртом. Кроме того, грамположительные бактерии имеют более выраженный пептидогликановый слой, в котором после обработки спиртом сужаются поры, что также делает невозможным вымывание красителя. В результате грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.
У грамотрицательных бактерий отсутствуют магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, пептидогликановый слой значительно тоньше, а размеры пор шире. Поэтому при обработке спиртом краситель легко вымывается, бактерии обесцвечиваются и при использовании дополнительного красного красителя грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет.
Методика окраски по Граму (этапы окраски по Граму представлены на стенде).
1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты, затем краситель сливают.
2. Наносят раствор Люголя на 1 мин.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Препарат промывают водой.
5. Мазок докрашивают водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
Поиск по сайту: