Р-ция непрямой (пассивной)гемагглютинации, РКОА

Сущность непрямой, или пассивной, р-ции гемагглютинации заключается в том, что эритроциты, обладая способностью адсорбировать на себе антигены, становятся «чувствительными» (сенсибилизированными) к соответствующей иммунной сыворотке. Под воздействием специфических антител сенсибилизированные эритроциты склеиваются и выпадают в осадок, образуя на дне пробирки гемагглютинат.

Отличаясь высокой чувствительностью и специфичностью, РНГА позволяет обнаруживать минимальные кол-ва антител и неполноценные антигены полисахаридной природы.

Для постановки РНГА требуются:

1. Сыворотка, подлежащая исследованию.

2. Растворимый антиген для сенсибилизации эритроцитов.

3. Эритроциты

4. Изотонический раствор хлорида натрия

Р-цию непрямой гемагглютинации ставят в пластинках из органического стекла с лунками.

1. Подготовка эритроцитов для постановки РГА. Для постановки этой р-ции пользуются свежими или консервир эритроцитами барана,быка или человека, полученными из дефибринированной крови. Из крови берут осадок эритроцитов в объеме 0,1- 1 мл и 2-3 раза отмывают его от остатка сыворотки в десятикратном объеме стерильного изотонического р-ра хлорида натрия.

Отмытые эритроциты могут быть использованы в течении 48ч. После промывания эритроц приступают к сенсибилизации их антигеном. Отмытые эритроц мешивают с антигеном, кол-во которого определяется его качеством и способностью адсорбироваться на эритроцитах. Смесь антигена с эритроцитами помещают в термостат на 1 -2ч после инкубации взвесь сенсибилизированных эритроцитов центрифугируют, отмывают изотоническим раствором хлорида натрия и из осадка готовят 0,5- 1% взвесь эритроцитов для постановки р-ции геммаглютинации. Приготовленная взвесь может хранится в холодильн при t 3-4 С до появления признаков гемолиза

2. Постановка р-ции. Приготовленные разведения сыворотки разливают в лунки по 0,5 мл. к каждому разведению исслед. Сыворотки + от 0,1 до 0,5 мл 0,5- 1% взвеси; сенсибилизиров эритроцитов.

Каждый опят сопровождается постановкой котролей на отсутствие спонтанной агглютинации (1 и 2) и контролем на специфичность р-ции (3и 4)

1. 0,5 мл изотонич р-ра хлорида натрия + рабоч доза сенсибилиз. Эритроцитов

2. 0,5 мл изотонич р-ра хлорида натрия+ рабочая доза несенсибилизированных эритроцитов.

3. Иммунная сыворотка, взятая в разведении, соответствующем ее титру (последн разведение, дающее положит р-цию в РНГА), нерабочая доза сенсибилизированных эритроцитов.

4. Нормальн сыворотка, не содержащ специфич антител+ рабоч доза несенсибилизир эритороцитов.

Результат р-ции геммагл учитывают после осаждения эритроцитов в контр пробирках непосредственно после инкубации в термостате при t 37С

Результат оценивают по внешнему виду осадка эритроцитов в лунках. В положительн случае +, эритроциты равномерно в виде «зонтика» покрывают почти все дно пробирки. При отрицательном результате (-) эритроциты оседают в зависимости от дна пробирки в форме компактного комочка, «пуговки»

Поиск по сайту: