З.Термолабильность ферментов

Зависимость между возрастанием скорости ферментативных реакций и денатурацией белков-ферментов при повышении температуры носит до­вольно сложный характер. Температура, соответствующая максимальной скорости ферментативной реакции, называется оптимальной. Для боль­шинства ферментов, выделенных из теплокровных животных, она равна 37 - 40 °С. Как правило, ферментативные процессы не могут протекать при

I

температуре выше 70 °С. При переходе к субоптимальным температурам скорость ферментативного катализа падает, достигая при О °С минималь­ной величины.

1. Влияние температуры на активность амилаш Слюны

В четыре пронумерованные пробирки наливают но 2 мл 1%-раствора крахмала. Пробирку 1 помещают в кипящую водяную баню, про­бирку 2 - в водяную баню при 40 °С, пробирку 3 оставляют при комнатной температуре и пробирку 4 помещают в лед. Через 10 мин, когда содержи­мое пробирок примет заданную температуру, во все пробирки добавляют по 0,5 мл разбавленной в 10 раз слюны, перемешивают с помощью стек­лянной палочки и вставляют в тех же условиях. Наблюдение за ходом гид­ролиза крахмала ведут 'по реакций с йодом. Для этого наносят на фар­форовую пластинку несколько капель раствора йода в иодиде калия и смешивают их с кайлймй гидролизуемой смеси из каждой пробирки, беря пробы через 1, 2, 4, 6, 8, 10 и 12 мин. По изменению окраски крахмала с йодом судят о степени гидролиза крахмала в каждой пробирке. Результаты

'•••-.•: •''...'''

наблюдений заносят в таблицу (табл. 2), помечая буквой «с» (синяя окра­ска) положительную пробу с йодом на крахмал, буквой «к» - положитель-

: ^:,• '

ную пробу на декстрины (окраска красных тонов) и буквой «ж» - отрица­тельную пробу (желтая окраска йЬда).

На основании полученных данных делают вывод о величине темпе­ратурного оптимума для амйлэзы.слюны.

2. Влияние температур^ на активность пепсина В четыре пробирки наливают по 2 мл молочноацетатной смеси. Про­бирку 1 помещают в кипящую водяную баню; пробирку 2 - в водяную ба-о при 40 °С; пробирку 3 оставляют при комнатной температуре; пробир-

ку 4 помещают в лед. Через 10 мин, когда содержимое пробирок примет необходимую температуру, во все пробирки добавляют по ОД мл желудоч­ного сока, быстро перемешивают и оставляют в тех же условиях. Наблю­дая за моментом появления на стенках пробирок первых сгустков казеина, с дующегося из казеиногена под действием пепсина, отмечают опти­мальную температуру действия данного фермента

Поиск по сайту: