Ультрафиолетовая микроскопия

Принцип метода. Разрешающая способность светового микроскопа находится в прямой зависимости от длины волны используемого света. При использовании ультрафиолетового света (УФ) разрешающая способность несколько повышается (примерно в двое). Для коротковолнового УФ стекло непрозрачно, поэтому линзы в таком микроскопе изготавливают из кварца, а изображение приходится фотографировать, т.к. глаз УФ не воспринимает. Из-за такой большой стоимости оборудования и его сложности УФМ находит лишь ограниченное применение. Однако, ее модификация, т.к. называемая флуоресцентная микроскопия, часто применяется для решения ряда важных биологических вопросов. Некоторые химические соединения поглощают УФ, но часть поглощенной энергии испускают в виде света с большими длинами волн, относящимися уже к видимой части спектра. Это явление называется флуоресценцией. При облучении флуоресцирующие объекты светятся на темном фоне ярким светом. Т.к. флуоресцирующий объект испускает видимый свет, который и проходит через микроскоп, то в этом случае из кварца должен быть только конденсор, т.е. часть микроскопа собирающий в пучок УФ. В биологии флуоресцентная микроскопия используется в основном при методике иммунофлуоресценции. Если животное иммунизировать специфическим антигеном (например, какой-либо определенной бактерией), то в его сыворотке будут содержаться антитела, специфически взаимодействующие с данным антигеном. Если к молекулам АТ предварительно химически присоединить флуоресцирующий краситель, они приобретают способность интенсивно флуоресцировать. Если такие АТ связываются со специфическим АГ, весь этот комплекс оказывается флуоресцирующим. Т.о. с помощью ФМ можно специфически выявлять клетки определенного вида бактерий в смешанной популяции микробов. В качестве флюорохромов используют многие вещества, наиболее часто изотиоцианат флюоресцеин (ФИТЦ) или более стабильные – родамин сульфофторид (РСФ), родомин сульфохлорид (РСХ).

Электронная микроскопия

Принцип метода. Электромагнитное поле влияет на пучок электронов аналогично тому, как стеклянная линза действует на пучок света. Длина волны электрона, ускоренного в электрическом поле 0,04 нм, т.е. в 10000 раз меньше, чем у видимого света, следовательно, предельное разрешение на несколько порядков выше, чем у светового микроскопа.

Практическое занятие 3. Техника микроскопирования микробиологических объектов.

Микроскопия бактерий. Простые и сложные методы окраски. Приготовление и микроскопия препаратов живых и фиксированных микроорганизмов. Изучение морфологии клеток (формы, наличие спор, капсул, жгутиков)

Поиск по сайту: