Окраска на кислотоустойчивость

I Теоретическая часть

Общая информация о пропионовокислых бактериях

Пропионовокислые бактерии, неспороносные грамположительные неподвижные палочки размером 0,5-0,8 х 1-1.5 мкм (в молодых культурах – искривленные, слегка ветвящиеся палочки, в более старых – кокковидной формы). Образуют колонии желтого, оранжевого или красного цвета, растут как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Непатогенны, обитают в рубце и кишечнике жвачных животных, в молочных продуктах (не в молоке). Оптимальная температура для роста 30-37°С. Большинство пропионовокислых бактерий - аэротолерантные анаэробы, получающие энергию в процессе брожения, основным продуктом которого является пропионовая кислота. Аэротолерантность их обусловлена наличием полностью сформированной ферментной системы защиты от токсических форм кислорода (супероксидный анион, перекись водорода). Пропионовокислые бактерии – возбудители пропиновокислого брожения, сбраживают глюкозу, лактозу, и др. углеводы, а так же некоторые спирты с образованием пропионовой и уксусной кислот.

Обнаруживаются в основном в сыре и молочных продуктах, а также на кожных покровах человека

Применение пропионовокислых бактерий

Пропионовокислые бактерии используют в основном в сыроделии при производстве сыров с высокой температурой второго нагревания и незначительно – при производстве кисломолочных продуктов. При выработке кисломолочных продуктов в качестве закваски используют пропионовокислые бактерии в комбинации с молочнокислыми бактериями.

Пропионовокислые бактерии также применяют для микробиологического синтеза витамина B12. У пропионовокислых бактерий обнаружена способность к активному синтезу витамина B12, который накапливается внутри клеток. Эта особенность используется для промышленного получения витамина B12 на отходах производства (молочной сыворотке и др.) с добавлением кукурузного экстракта в качестве источника витаминов.

II Экспериментальная часть

Цель работы: знакомство с основными принципами определения микроорганизмов. Изучение свойств бактерий, необходимых для описания бактериального штамма и его идентификации до уровня рода.

Задания:

1.Определить чистоту идентифицируемой бактерии и изучить морфологию ее клеток.

2.Описать культуральные свойства.

3.Изучить цитологические свойства идентифицируемых бактерий.

4.Изучить физиолого-биохимические свойства идентифицируемых бактерий.

5. Определить чувствительность бактерий к антибиотикам.

6. Заполнить таблицу и подвести итоги.

Изучение цитологических свойств идентифицируемых бактерий

Наличие эндоспор

Небольшое количество клеток с твердой среды помещают петлей на предметное стекло в каплю водопроводной воды и делают мазок. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют в пламени горелки и наносят на него 5%-ный раствор хромовой кислоты. Через 5...10 мин ее смывают водой. Препарат накрывают полоской фильтровальной бумаги и обильно смачивают бумагу карболовым фуксином Циля. Подогревают препарат над пламенем до появления паров (не до кипения), затем отводят его в сторону и добавляют новую порцию красителя. Эту процедуру проводят в течение 7 мин. Важно, чтобы краситель испарялся, но бумага не подсыхала. После охлаждения ее снимают, препарат промывают водой и тщательно промокают фильтровальной бумагой.

Далее обесцвечивают цитоплазму клеток, обрабатывая 1%-ным раствором соляной или серной кислот в течение 15…30 с. Затем препарат промывают водой и окрашивают метиленовым синим в течение
2 мин.

Если все операции проделаны правильно, окраска получается контрастной, и ярко-красные споры четко выделяются на голубом фоне цитоплазмы.

Окраска по Грамму

1. На обезжиренном предметном стекле в капле воды делают тонкий мазок, чтобы клетки равномерно распределялись по поверхности стекла и не образовывали скоплений.

2. Препарат высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают в течение 1...2 мин карболовым генциановым или кристаллическим фиолетовым.

3.Затем краситель сливают и мазки обрабатывают 1…2 мин раствором Люголя до почернения.

4.Сливают раствор Люголя, препарат обесцвечивают в течение 0,5…1,0 мин 96%-ным этиловым спиртом и быстро промывают водой.

5.Дополнительно окрашивают в течение 1…2 мин водным фуксином.

6.Краситель сливают, препарат промывают водой и высушивают.

7.Микроскопируют с иммерсионной системой.

При правильном окрашивании грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый, грамотрицательные – розово-красный цвет.

Для получения достоверных результатов необходимо готовить мазки для окраски по Грамму из молодых, активно растущих (обычно односуточных) культур, так как клетки из старых культур иногда дают неустойчивую реакцию по Грамму. Грамотрицательные бактерии могут выглядеть как грамположительные, если бактериальная пленка (мазок) слишком толста и обесцвечивание спиртом не проведено до конца. Грамположительные бактерии могут выглядеть как грамотрицательные, если мазок переобесцвечен спиртом.

Окраска на кислотоустойчивость

На обезжиренном предметном стекле в капле воды готовят мазок исследуемой бактерии. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. На мазок помещают фильтровальную бумагу, заливают препарат карболовым фуксином Циля и 2–3 раза подогревают его до появления паров, держа предметное стекло с помощью пинцета высоко над пламенем горелки. За появлением паров наблюдают, глядя на мазок сбоку, и при их появлении тотчас отставляют препарат в сторону. Дают препарату остыть, снимают фильтровальную бумагу, сливают краситель и мазок промывают водой. Затем клетки обесцвечивают 5%-ным раствором кислоты Н SO . Для этого предметное стекло погружают 2–3 раза в стакан с серной кислотой, не задерживая его в ней. Препарат вновь тщательно промывают водой и докрашивают от 3 до 5 мин метиленовым синим (по Леффлеру). Краску сливают, препарат промывают водой, высушивают и рассматривают с иммерсионной системой. При правильном окрашивании клетки кислотоустойчивых бактерий имеют красный цвет, а некислотоустойчивых – синий.

Поиск по сайту: