Химический состав цельной спермы (органические вещества)

Примечание: * - плазма спермы; T – семенник; E – придаток семенника; A – ампулы спермиопроводов; V – пузырьковидные железы

В зависимости от цели разбавления спермы и условий ее хранения в состав сред для разбавления спермы входят сахара (глюкоза, лактоза и др.), соли (натрия цитрат и др.), желток куриного яйца, антибактериальные препараты (спермосан-3), а также глицерин, предохраняющий клетки от отрицательного воздействия низких температур. Чтобы предупредить контаминацию микроорганиз­мами, разбавитель готовят в стерильном боксе. Некоторые компо­ненты не выдерживают нагревания (желток куриного яйца, глице­рин), поэтому стерилизовать их термическими способами нельзя. Компоненты растворяют в прокипяченной дистиллированной воде. Разбавитель хранят при температуре 35°С не более З…4ч. Можно использовать и заранее подготовленную среду, хранящую­ся и стерильной упаковке.

Охлаждение. Традиционный способ хранения спермы барана, быка и жеребца — ее охлаждение до 2...5°С. В этом случае разбавленную сперму барана сохраняют в течение 24 ч, жеребца — 48 ч и быка — 79 ч после получения. При этом для разбавления спермы барана и быка используют глюкозо-цитратно-желточной среды (ГЦЖ), жеребца – глюкозо-желточную, лактозо-желточную или молочно-желточную среды (сокращенно ГЖ, ЛЖ, МЖ).

Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Сперму разбавляют сразу же после оценки ее качества. Температуры спермы и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить температурный шок спермиев. Разбавляют сперму в градуированном смесителе. Среду добавляют к сперме небольшими порциями. После добавления каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду и сперму.

Сперму хряков хранят при температуре 16...20°С, разбавляя ее средами, содержащими хелатон. Наиболее распространенной яв­ляется глюкозо-хелато-цитратная среда (ГХЦ), в состав которой входят следующие компоненты: глюкоза — 6 г, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты — 0,37 г, на­трия гидрокарбонат — 0,12 г, натрия нитрат — 3,6 г, спермосан-3 — 25...30 тыс. ЕД, вода дистиллированная — 100 мл.

Криоконсервация, или замораживание - самый перспективный способ хранения спермы животных и человека вне организма.

Замораживание - основной способ хранения спермы быка. Сперму замораживают в облицованных гранулах, необлицованных гранулах и в соломенках (пайеттах).

Сперму быка, предназначенную для хранения в виде необлицованных гранул, разбавляют лактозо-желточно-глицериновой сре­дой, в состав которой входит 11,5 г лактозы, 100 мл дистиллиро­ванной воды, 20 мл желтка куриного яйца, 5 мл глицерина, 50 тыс. ЕД спермосана-3. Простерилизованный раствор лактозы охлаждают до 35...40⁰ С и добавляют остальные компоненты.

Перед замораживанием разбавленную сперму выдерживают в холодильнике при температуре 5⁰ C 3...4 ч. В это время, называемое периодом эквилибрации, выравниваются концентрации глицерина в среде и спермиях. Глицерин защищает спермии от действия низ­ких температур только при проникновении внутрь клеток.

Сперму быка и барана можно замораживать в виде необлицованных гранул на фторопластовой пластине. Объем лунок должен быть известен заранее, чтобы не измерять его в условиях низких температур. Пластину предварительно стерилизуют методом ультрафиолетового облучения (УФО) или спиртовыми тампонами, затем погружают в жидкий азот и выдерживают в нем до прекращения кипения. После этого плас­тину укрепляют на расстоянии 5...10см от поверхности азота (при температуре – 160… -170°C) и в течение 2 мин быстро заполняют лунки спермой из пипетки или шприца (рис. 2.13). Затем пластину вновь погружают в жидкий азот на 1...2мин. После заморажива­ния спермы пластину поднимают из жидкого азота, гранулы спер­мы собирают в сачок или контейнер, пересыпают в охлажденный контейнер и переносят в сосуды Дьюара с жидким азотом.

Рис. 20. Заполнение спермой лунок охлажденной фторопластовой пластины:

1 — широкогорлый сосуд Дьюара (или ванна с жидким азотом); 2 — фторопластовая пласти­на; 3 — лунки на 0,1…0,2 или 0,5 мл; 4 — дер­жатель пластины; 5 — пипетка для фасовки спермы

Чтобы получить облицованные гранулы, сперму быка разбав­ляют в 2 этапа (средой № 1 и № 2) непосредственно в полиэтиле­новом спермоприемнике.

Среда № 1: 11%-й раствор лактозы — 63 мл (можно заме­нить таким же количеством 11 %-го раствора сахарозы); желток куриного яйца —30 мл; глице­рин — 7 мл; спермосан-3 — 50... 90 тыс. ЕД.

Среда № 2: вода дистиллированная — 100 мл; лактоза — 6 г (можно заменить таким же количеством сахарозы); натрия цитрат — 1,4 г; глицерин — 5 мл; спермосан-3-50...90 тыс. ЕД.

Спермоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой, в которую выдавливают разбавленную сперму. Заполнен­ную спермой трубку разделяют с помощью автомата ПРЖ (путем термической сварки) на от­дельные дозы по 0,25...0,33 мл с герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контей­неры, которые закрывают поролоновыми пробками. Контейнеры закрепляют в обоймах специального устройства, которое помеща­ют в холодильник. После 4...6-час экспозиции при температуре 2...5°С обойму аппарата с контейнерами погружают в жидкий азот на 8...10 мин и затем переносят в сосуд Дьюара для хранения.

В полипропиленовых соломинках (пайеттах) сперму быка за­мораживают по 0,25 или 0,5 мл. Один конец соломинки предварительно закрывают специальным герметизирующим составом. Эякулят разбавляют лактозо-фруктозо-раффинозо-магниево-глицерино-желточной средой (ЛФРМГЖ) либо трисбуферной средой, содержащей трисгидрооксиметиламинометан, лимонную кислоту, фруктозу, желток куриного яйца и глицерин, или коммерческими криопротекторными средами, не содержащими компонентов животного происхождения, например Triladyl, Biladyl (Minitube, Германия). После разбавления сперму расфасовывают в пайетты вакуумным способом. Заполненные спермой соломинки герметизируют, маркируют, укладывают на штативы и ставят на эквилибрацию на З...4 ч при температуре 4°С, затем замораживают в парах жидкого азота при температуре -120 - 130°С в течение 5 мин на специальном устройстве, которое за счет пенопластовых поплавков удерживается на заданной высоте над его поверхностью.

Технология замораживания спермы быка в полипропиленовых соломинках была разработана в 1975 г. во Франции профессором Л. Кассу. В СССР она впервые была внедрена в Литве в 1983 г.

В настоящее время эта методика замораживания спермы является основной и наиболее совершенной. На всех этапах работы со спермой при ее замораживании в соломинках используются высокотехнологическое цифровое оборудование и современные расходные материалы. Управление основными технологическими процессами осуществляется при помощи гибкой, многофункциональной и модульной программы Минитюб ИДА (Minitube IDA). Программное обеспечение имеется на английском, немецком, испанском, итальянском и русском языках. Программа позволяет автоматизировать практически все процессы работы со спермой на крупных племпредприятиях – от оценки качества полученного экулята до определения объема разбавителя, разбавления и охлаждения спермы, ее расфасовки на спермодозы, герметизации и маркирования пайетт, а также их программируемого замораживания. Идентификация каждого эякулята может быть осуществлена вручную, штрих-кодом или с помощью транспондера.

Поиск по сайту: