В рабочую тетрадь законспектировать принципы гистологической обработки материала

Принципы гистологической обработки материала.

Предметом гистологического анализа является гистологический препарат. Гистологический препарат – это тонкий срез кусочка органа или ткани, подвергнутый специальной гистологической обработке.

1. Взятие материала для приготовления гистологического препарата. Материал для приготовления гистологического препарата может быть забран от трупа человека или животного в ходе патологоанатомического вскрытия, а также от живого организма путем биопсии. Из органа вырезается кусочек, размеры которого не должны превышать 1см³. Обязательным условием является работа со свежим материалом, без предварительной заморозки и посмертных изменений.

2. Фиксация материала. Фиксация проводиться для того, чтобы остановить в вырезанном кусочке органа протекающие жизненные процессы, стабилизировать структуры в прижизненном состоянии и предупредить последующий их распад. В качестве фиксаторов используются жидкие химические вещества: этанол, метанол, ацетон, формалин, формальдегид, соли тяжелых металлов. Также могут использоваться сложные фиксаторы, состоящие из смеси химических веществ: фиксаторы Карнуа, Буэна, Лили, Серра и т.д. Объем фиксирующей жидкости должен в 20 раз превышать объем кусочка.

3. Обезвоживание, обезжиривание и уплотнение материала. На этом этапе из материала удаляется вода. Этот процесс осуществляется в спиртах возрастающей концентрации и в смеси спирта с эфиром в следующей последовательности: 50% этанол → 70% этанол → 96% этанол (I) → 96% этанол (II) → 100% этанол → 100% этанол + эфир (I) → 100% этанол + эфир (II). В каждом отмеченном растворе кусочек находится не менее суток. В последующем кусочки материала уплотняются, путем пропитывания парафином, целлоидином, желатином или другими пластическими массами.

4. Заливка материала. Заливка материала производиться в парафин, целлоидин или желатину для того, чтобы предать ему такую консистенцию, чтобы этот материал можно было резать на очень тонкие пластинки - гистологические срезы. Залитый материал может долго храниться. Чаще всего заливают в парафин. Вначале материал пропитывают жидким парафином в термостатах при высокой температуре, затем на воздухе при комнатной температуре заливают в парафин, который застывает и становиться твердым. Залитый материал называют гистологическим блоком.

5. Приготовление гистологических срезов. Залитый в парафин кусочек материала приклеивают на деревянную или пластиковую основу, укрепляют на предметном столике микротома. Микротом это прибор, оснащенный микротомным ножом, с помощью которого можно изготавливать гистологические срезы толщиной 3-5 микрометров.

6. Окраска гистологических срезов. Перед окрашиванием гистологических срезов из последних следует удалить частицы затвердевших сред. Срезы, полученные из парафиновых блоков, депарафинируют ксилолом, а затем окрашивают. Клетки и ткани животного происхождения обладают избирательной способностью воспринимать разные красители. Это позволяет определять в окрашенном препарате различные структуры.

Красители по химическим свойствам делятся на кислые и основные красители.

К группе кислых красителей относятся эозин, кислый фуксин, пикрофуксин, пикриновая кислота. Наиболее распространенный кислый краситель – эозин. Эозин окрашивает протоплазму, оболочку клеток, межклеточное вещество соединительной ткани в розовый цвет. Микроскопические структуры, окрашиваемые эозином и подобными ему красителями, называются эозинофильными или оксифильными или ацидофильными. Способность воспринимать эти красители называется эозинофилие й или оксифилией или ацидофилией.

К группе основных красителей относятся: гематоксилин кармин, сафранин, метиловый синий, азур. Наиболее распространенный краситель этой группы – гематоксилин. В зависимости от способа приготовления красителя различают гематоксилин Майера, Бемера, Вейгерта, железный гематоксилин Гейденгайна. Красящие свойствами обладают не сам гематоксилин, а продукт его окисления. Гематоксилин окрашивает структуры в синий или фиолетовый цвет. Структуры, окрашиваемые основными красителями, будут называться базофильными. Свойство воспринимать эти красители называется базофилией.

Окраска препаратом гематоксилином и эозином называется обзорной окраской и является наиболее распространенной.

Существуют красители со специальными свойствами, позволяющие выявлять содержание разных химических веществ в клетке. Судан-3 окрашивает жировые включения в оранжевый цвет. Осмиевая кислота окрашивает жир в черный цвет. Импрегнация азотнокислым серебром нервной ткани позволяет выявить ее компоненты, окрашиваемые черным цветом. Гликоген выявляется кармином Беста. Такие методики окраски называются гистохимическими.

7. Обезвоживание, просветление и заключение окрашенных срезов в бальзам. Окрашенные срезы обезвоживают в 2-х порциях 96 % этанола и просветляют в карбол-ксилоле. Для дальнейшего изучения окрашенные препараты заключить в консервирующую среду. Для этих целей используется продукты смолы хвойных деревьев, так называемые бальзамы: канадский, пихтовый, кедровый бальзам. Также могут использоваться синтетические смолы.

На предметное стекло на окрашенный срез наносят каплю бальзама и покрывают покровным стеклом. Препарат готов для исследования и может храниться долгое время.

Освоение техники окраски гистологических препаратов

С помощью приведенных ниже методик самостоятельно окрасить два препарата: один из животных, другой из растительных тканей.

Методики самостоятельной окраски препаратов из животных тканей (парафиновый препарат)

1. Ксилол 2 мин.

2. Спирт 96% 2 - мин.

3. Гематоксилин 5-15 - мин.

4. Вода водопроводная 5 - мин.

5. Эозин 1 - мин.

6. Вода дистиллированная 1 - мин.

7. Спирт 96 % 1 - мин.

8. Спирт 96% 1 - мин.

9. Ксилол 1 - мин.

10. Заключить срез в бальзам.

Освоение навыков микроскопии и зарисовки гистологических препаратов

В рабочие тетради законспектировать правила работы с микроскопом.

Правила работы с микроскопом

1. Работать за микроскопом следует сидя.

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли чистой сухой марлевой салфеткой окуляры, объективы, зеркало.

3. Микроскоп установить перед собой, на 2-3 см от края стола. С правой стороны расположить открытый альбом для практических занятий.

4. Включить подсветку, отрегулировать яркость подсветки.

5. Привести микроскоп в рабочее состояние:

а. поднять конденсор до предела, открыть полностью диафрагму;

б. установить объектив малого увеличения на расстоянии 1-1,5см от предметного столика;

в. свести окуляры к такому расстоянию, чтобы, смотря в них двумя глазами, получить одно поле зрения.

6. Поместить препарат на предметный столик микроскопа покровным стеклом кверху (обратить на это внимание). Передвигать препарат с помощью рукоятки перемещения предметного столика так, чтобы найти место, подлежащее к изучению.

7. Опустить конденсор до положения, обеспечивающего наилучшее освещение препарата на “малом” увеличении.

8. Рассмотреть препарат с помощью 10-кратного объектива, который чаще будет называться “малым увеличением”. Найти место, подходящее для изучения при большом увеличении, поставить его в центр поля зрения. Отрегулировать резкость микровинтом.

9. При переходе с меньшего увеличения на большее необходимо, не меняя фокусного расстояния, повернуть револьверную головку объективов так, чтобы в рабочее положение встал 40-кратный объектив («большое увеличение»). Микровинтом добиться резкого изображения. Работа с макровинтом на большом увеличении запрещается, т.к. легко можно раздавить препарат.

10. Левая рука должна находиться на микрометрическом винте, слегка поворачивая его в обе стороны для просматривания деталей среза лежащих на разной глубине поверхности среза.

11. Запрещается убирать препарат из под объектива большого увеличения. Для того чтобы убрать препарат с предметного столика микроскопа в рабочее положение ставится малый объектив и препарат снимается со столика микроскопа.

12. Запрещается развинчивать какие-либо части микроскопа. В случае неисправности микроскопа обращаться к преподавателю.

Соблюдая указанные правила микроскопии, изучить с помощью микроскопа гистологический препарат щитовидной железы. Зарисовать в рабочую тетрадь видимую микроскопическую картину.

ПРЕПАРАТ № 197. Щитовидная железа собаки

Поиск по сайту: