ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСОВ И МЕТОДЫ ИХ ИНДИКАЦИИ

I. При выделении вирусов из различных инфекционных материалов от больного (кровь, моча, фекалии, слизистые отделяемые, смывы из органов) применяют культуры клеток, обладающие наибольшей чувствительностью к предполагаемому вирусу. Для заражения используют культуры в пробирках с хорошо развитым монослоем клеток. Перед заражением клеток питательную среду удаляют и в каждую пробирку вносят по 0,1-0,2 мл взвеси испытуемого материала, предварительно обработанного антибиотиками. После 30-60 мин. контакта вируса с клетками удаляют избыток материала, вносят по 1,0-1,5 мл на пробирку поддерживающей среды и оставляют в термостате до выявления признаков размножения вируса. Индикатором наличия вируса в зараженных культурах клеток может служить:

1) развитие специфической дегенерации клеток - цитопатическое действие вируса (ЦПД), которое может быть трех основных

типов:

а) кругло - или мелкоклеточная дегенерация;

б) образование многоядерных гигантских клеток - симпластов;

в) развитие очагов клеточной пролиферации, состоящих из нескольких слоев кле-

ток.

2) Обнаружение внутриклеточных включений, располагающихся в цитоплазме и ядрах пораженных клеток.

3) Положительная реакция гамагглютинации (ГА).

4) Положительная реакция гемадсорбции.

5) Феномен бляшкообразования: монослой зараженных вирусом клеток покрывается тонким слоем агара с добавлением индикатора нейтрального красного. При наличии вируса в клетках образуются бесцветные зоны («бляшки») на розовом фоне агара.

6) При отсутствии ЦПД или ГА можно поставить реакцию интерференции: исследуемая культура повторно заражается вирусом, вызывающим ЦПД. В положительном случае ЦПД будет отсутствовать (реакция к интерференции положительная). Если в исследуемом материале вируса не было, наблюдаем ЦПД.

II. Для вирусологических исследований используют куриные эмбрионы 7-12-дневного возраста

Перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона. При овоскопировании живые эмбрионы подвижны, хорошо виден сосудистый рисунок. Простым карандашом отмечают границы воздушного мешка, или место расположения эмбриона, или границы желточного мешка.

Заражение куриных эмбрионов производят в асептических условиях, стерильными инструментами, предварительно обработав скорлупу над воздушным пространством йодом.

Могут быть использованы различные методы заражения куриных эмбрионов: нанесение вируса на хорион-аллантоисную оболочку, в амниотическую и аллантоисную полости, в желточный мешок. Выбор метода заражения зависит от биологических свойств изучаемого вируса.

Индикация вируса в курином эмбрионе производится по гибели эмбриона, положительной реакции гемагглютинации на стекле с аллантоисной или амниотической жидкостью, по фокусным поражениям, («бляшкам»), на хорион-аллантоисной оболочке.

III. Лабораторные животные могут быть использованы для выделения вирусов из инфекционного материала, когда невозможно использовать более удобные системы (культуры клеток или куриные эмбрионы). Используют преимущественно новорожденных белых мышей, хомяков, морских свинок, крысят. Заражение животных производится по принципу цитотропизма вируса: пневмотропные вирусы вводятся интраназально, нейротропные - интрацеребрально, дерматотропные - на кожу.

Индикация вируса основана на появлении признаков заболевания у животных, их гибели, патоморфологических изменений в тканях и органах, а также на положительной реакции гемагглютинации с экстрактами из органов.

Поиск по сайту: