 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
Экспериментальная часть
Руководство к выполнению лабораторной работы
«Абсорбционная спектроскопия макромолекул: ДНК»
Теоретическая часть. Общие принципы абсорбционной спектроскопии макромолекул
Ознакомиться в пособии «Оптическая спектроскопия биологических макромолекул» Е.В. Немцевой (взять в библиотеке СФУ), пп.1.1-1.2, с.4-26.
Экспериментальная часть
1. Приготовьте 4 мл раствора ДНК, смешав 10 мкл концентрированного раствора с 4-мя мл раствора NaCl (0,15М).
Измерьте спектр поглощения этого раствора в диапазоне 200-500 нм. Проверьте наличие светорассеяния, сделайте поправку (если оно есть). Определите концентрацию ДНК, исходя из табличных данных, что D260 =1 соответствует концентрации 5 мкг/мл.
2. Разлейте раствор пополам в два бутылочки с завинчивающимися крышками, плотно закройте и опустите пробирки в горячую водяную баню (около 95°С). Будьте осторожны с горячей баней!
Выдержав пробирки при такой температуре 20 мин, одну из них быстро опустите в лед, а вторую оставьте в постепенно остывающей бане.
Дайте растворам охладиться до комнатной температуры, измерьте спектр поглощения в диапазоне 200-500 нм:
а) быстро охлажденного раствора ДНК,
б) медленно остывшего раствора ДНК.
3. По измеренным значениям оптической плотности рассчитайте величины гиперхромного эффекта для растворов а) и б):
,
где D1 и D2 - оптические плотности при 260 нм для нагретой и исходной (нативной) ДНК соответственно.
4. Анализ результатов и написание отчета
Отчет по работе должен состоять из титульного листа, теоретической части, описания методов исследования, результатов и обсуждения, выводов.
Минимальный материал, предоставляемый в разделе «Результаты и обсуждение» отчета:
А) Спектры поглощения нативной, денатурированной и ренатурированной ДНК.
Б) Результаты расчета гиперхромного эффекта.
В) Анализ спектров в виде таблицы:
| № эксперимента | Образец | Кювета сравнения | Максимум спектра поглощения | |
| l, нм | D | |||
| … |
Г) При написании выводов следует обратить внимание на следующие вопросы:
· Чем отличаются спектры нативной, денатурированной и ренатурированной ДНК? Чем это объясняется?
- Произошла ли полная денатурация ДНК в нагревания на водяной бане?
- Произошла ли полная ренатурация ДНК в результате медленного охлаждения?
Вопросы для самопроверки:
1. Что такое первичная, вторична, третичная и четвертичная структура ДНК? Какими связями эти структуры удерживаются?
2. Что такое оптическая плотность, пропускание, спектр поглощения? Как спектрофотометр получает эти характеристики?
3. Какие эффекты влияют на спектры поглощения ДНК?
4. Зависимость между какими характеристиками образца отражена в законе Бугера-Ламберта-Бера? При каких условиях этот закон нарушается?
5. Какие задачи решают с помощью абсорбционной спектроскопии нуклеиновых кислот?
Поиск по сайту: