Посев исследуемого материала

Питательные среды: п итательный агар; 2.5% кровяной агар; сахарный бульон, дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий.

Выделение микроорганизмов из мочи не позволяет дифференцировать бактериурию, возникающую в результате загрязнения мочи нормальной микрофлорой дистального отдела уретры, от бактериурии, развивающейся при инфекционных процессах в мочевыводящей системе, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы. С этой целью применяют количественные методы исследования, основанные на определении числа микробных клеток в 1 мл мочи (степень бактериурии). Для определения степени бактериурии используют несколько методов: метод серийных разведении мочи и метод секторных посевов.

Метод секторных посевов. Платиновой петлёй производят посев мочи (30-40 штрихов) на сектор А чашки Петри с простым питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор І и аналогичным образом – из сектора І во ІІ и из ІІ в ІІІ. Чашки инкубируют при 37°С 18-24 часа, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах.

Одновременно с подсчетом количества колоний, выросших на чашке Петри, можно выделить чистую культуру возбудителя, идентифицировать ее и определить чувствительность к антимикробным препаратам.

Определение степени бактериурии по количеству выделенных колоний производят по таблице.

Метод серийных разведении мочи заключается в посевах определенного количества различных разведении мочи на плотные питательные среды и последующего подсчета числа выросших колоний в 1 мл неразведенной мочи. Метод достаточно точен, но требует большой затраты питательных сред, лабораторной посуды и времени.

Ускоренные методы основаны на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. Они дают менее точные результаты, чем метод секторальных посевов, и чаще используются при массовых профилактических обследованиях больших контингентов людей, для экспресс диагностики. При использовании ускоренных методов лаборатория дает предварительный ответ через день после получения результатов и окончательный через 4 дня после выделения чистой культуры микроорганизмов, их идентификации и определения чувствительности к антибактериальноым препаратам.

Нитритный тест. Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма представителей семейства Enterobacteriaceae, могут быть обнаружены в моче с помощью реактива Грисса. Для этого смешивают приготовленные растворы с 1 мл мочи. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочинеменее 10⁵ микробных клеток.

Эффективность метода можетбыть значительно повышена добавлением в мочу нитратов с последующей инкубацией при 37 °С в течение 2—4 часовперед постановкойнитритного теста.

ТТХ-тест. Трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный нерастворимый в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии.

Готовят три раствора: 1. Насыщенный раствор двузамещённого фосфорнокислого натрия; 2. 750 мг ТТХ растворяют в 100 мл раствора 1; 3. Рабочий раствор — 4 мл раствора 1 смешивают со 100 мл раствора 2. Хранят растворы в прохладном защищенномот света месте. Срок хранения растворов 1 и 2 — до 2-х месяцев, рабочего раствора — не более 2-х недель.

При постановке реакции пользуются стерильной посудой.

К 2 мл мочи прибавляют 0,5мл рабочего раствора и помещают после перемешивания в термостат при 37°С. После 4 х часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о наличии в 1 мл мочи не менее 10⁵ микробных клеток.

Поиск по сайту: