Подземных органов

Проведите гистохимические реакции обнаружения БАВ в ЛРС по методике преложенной преподавателем. Сделайте вывод о содержании БАВ в ЛРС.

Запишите в рабочий журнал сводную таблицу реактивов для обнаружения БАВ в сырье.

Гистохимические реакции дают дополнительные сведения для установления подлинности ЛРС. Кроме того, они часто позволяют обнаружить вещества непосредственно в тканях и клетках, таким образом, дают возможность определить их локализацию в тканях растения, что имеет важное значение при решении многих практических вопросов использования растительного сырья.

Реакции проводятся на предметном стекле, часовом стекле или закрытом бюксе, в зависимости от характера и продолжительности воздействия реактива.

Вопросы для самоконтроля.

1. В чем состоит цель микроскопического анализа?

2. Опишите методики подготовки различных морфологических ЛРС к микроскопическому исследованию.

3. Опишите технику приготовления временных препаратов различных морфологических групп ЛРС.

4. Перечислите план (алгоритм) описания различных морфологических ЛРС.

5. Перечислите различные типы устьичных аппаратов.

6. Перечислите различные формы кристаллов оксалата кальция.

7. Назовите различные типы железок, волосков.

8. Как отличить при микроскопии корни растений от коры?

9. Назовите реактивы на слизь, крахмал, инулин, жирные и эфирные масла, антраценпроизводные, дубильные вещества.

Тема 3. Фармакогностический анализ лекарственного растительного сырья. Товароведческий анализ.

Цель занятия:

1. понять сущность и значение товароведческого анализа;

2. познакомиться с правилами приемки сырья и методами отбора проб для последующего анализа лекарственного растительного сырья;

3. научиться проводить анализ лекарственного сырья на определение примесей, зараженности амбарными вредителями, влажности, содержание золы, содержание экстрактивных веществ.

Товароведческий анализ включает правила приемки сырья, регламентирует отбор проб для проведения последующих испытаний на содержание примесей, степени измельченности, степени заражения вредителями, содержания золы, влаги и действующих веществ. В ходе товароведческого анализа определяют числовые показатели: содержания влаги, золы, примесей, измельченности сырья, содержания действующих или экстрактивных веществ, микробиологической чистоты сырья, радиационного контроля.

Объекты для лабораторного исследования: Средняя проба цельного ЛРС по указанию преподавателя.

Задание 1. Правила приемки и отбора проб для анализа лекарственного растительного сырья.

Ознакомьтесь с правилами приемки ЛРС и методами отбора проб для анализа. Получите подготовленную для анализа среднюю пробу. Проверьте правильность заполнения этикетки. Проведите внешний осмотр образца сырья. (На что необходимо обратить внимание?) Выделите методом квартования три аналитические пробы.

Объективность заключения о подлинности и доброкачественности ЛРС зависит от правильности отбора пробы из общей партии сырья.

Приемку сырья и отбор проб регулирует ОФС 42-0013-03 (взамен ГФ ХI, вып. 1, т. 1, с. 267) «Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб».

Приемку лекарственного растительного сырья производят партиями и сериями.

Партия ЛРС («ангро») – определенное количество цельного, обмолоченного, прессованного ЛРС, однородного по способу подготовки, одного наименования, и оформленного одним документом, удостоверяющим его качество, предназначенное для производства промышленных серий фасованной продукции в упаковке «ангро» и в потребительской упаковке.

Серия ЛРС – определенное количество однородного по всем показателям фасованного лекарственного растительного сырья (цельное, измельченное, порошок), произведенное в течение одного технологического цикла, оформленного одним документом качества. Серия формируется из одной или нескольких (но не более трех) партий ЛРС.

Документ качества должен содержать следующие данные:

1. -номер и дату выдачи документа;

2. наименование и адрес отправителя;

3. наименование сырья;

4. номер партии;

5. массу партии;

6. год и месяц сбора или заготовки;

7. район заготовки (для сырья от дикорастущих растений);

8. результаты испытания качества сырья;

9. наименование НТД;

10. подпись и должность ответственного лица.

Примечание. В настоящее время, кроме перечисленных данных документ, сопровождающий партию, должен иметь данные о радиационном контроле, степени зараженности амбарными вредителями и микробиологической чистоты.

Заключение о качестве выдается на основании контроля качества пробы, отобранной от каждой серии (партии) продукции. Отбор проб для проведения контроля должен проводиться с соблюдением действующих санитарно-гигиенических правил и условий, исключающих загрязнение продукции и обеспечивающих безопасность персонала.

Этапы приемки сырья:

1 этап. Осмотреть каждую единицу продукции для установления соответствия упаковки и маркировки требованиям НД. Так же обращают внимание на правильность упаковки, состояние тары (отсутствие подмочки, подтеков, и других повреждений, отрицательно влияющих на качество сырья).

2 этап. Отобрать выборку из неповрежденных единиц продукции, взятых из разных мест партии. Объем выборки единиц продукции для анализа зависит от общего количество единиц продукции.

Таблица 1

Неполные 10 единиц продукции приравнивают к 10 единицам (например, при наличии в партии 51 единицы продукции объем выборки составляет 6 единиц).

Проверку качества лекарственного растительного сырья из поврежденных единиц упаковок производят отдельно от неповрежденных, проверяя каждую единицу упаковки.

Серия (партия) сырья, от которой отобраны образцы на анализ, должна храниться изолированно до получения результатов контроля.

Арбитражные образцы должны храниться в течение срока его годности, в специально отведенных помещениях, обеспечивающих их сохранность в условиях, предусмотренных стандартом качества.

3 этап. Вскрывают попавшие в выборку единицы продукции и путем внешнего осмотра определяют однородность сырья по способу подготовки (цельное, измельченное, прессованное и т. д.), цвету запаху, засоренности; наличие плесени, гнили, устойчивого постороннего запаха, не исчезающего при проветривании; засоренность ядовитыми растениями и посторонними примесями (камни, стекло, помет животных и птиц и т.д.)

Если при внешнем осмотре установлена неоднородность сырья, наличие плесени и гнили, засоренность посторонними растениями в количествах, явно превышающих допустимые примеси и т.д. вся партия должна быть рассортирована, после чего вторично предъявлена к сдаче.

При обнаружении в сырье затхлого запаха, не исчезающего при проветривании, ядовитых растений и посторонних примесей (стекло, помет грызунов и птиц и д.р.), зараженности амбарными вредителями II и III степени партия сырья не подлежит приемке.

4 этап. Проводят отбор проб из каждой единицы продукции, отобранной для вскрытия. Берут три точечные пробы: сверху, из середины и снизу на глубине не менее 10 см от края упаковки.

Точечная проба – минимальное количество пробы, отобранное из каждой единицы продукции в установленном порядке за один прием для составления объединенной пробы. Масса точечной пробы не регламентируется, но они должны быть примерно одинаковыми. Из всех точечных проб, осторожно перемешивая, составляют объединенную пробу (совокупность всех точечных проб, отобранных от единиц продукции, попавших в выборку и тщательно перемешанных между собой).

Затем из объединенной пробы методом квартования выделяют специальные и среднюю пробы. Из средней пробы методом квартования выделяют 3 аналитические пробы (Смотри схему).

На тару с пробой ответственный за отбор проб должен наклеить этикетку.

На отобранной пробе указывают:

1. наименование лекарственного сырья;

2. производитель (поставщик);

3. номер серии (партии);

4. номер сопроводительных документов (сертификатов);

5. дата и место отбора пробы;

6. количество отобранной пробы;

7. условие хранения образца;

8. срок хранения пробы,

9. номер емкости из которой отобрана проба;

10. Ф.И.О. ответственного за отбор;

11. номер записи в журнале регистрации отбора проб;

12. указание, для какого вида анализа отобрана проба.

Процедура отбора проб оформляется записью в журнале регистрации отбора проб и актом отбора проб.

Порядок отбора проб от партии продукции

Партия продукции

Выборка партии

1 2 3 4 5

Е д и н и ц ы п р о д у к ц и и

▲▲▲ ▲▲▲ ▲▲▲ ▲▲▲ ▲▲▲

Точечные пробы

Объединенная проба

Квартование

Квартование

Аналитические пробы

(массы регламентируется ОФС 42-0013-03 (таблица 3))

Таблица 2

Таблица 3

При установлении в результате испытаний несоответствия качества сырья требованиям НД проводят его повторную проверку. Для повторного анализа от невскрытых единиц продукции отбирают выборку в соответствии с таблицей 1. Результаты повторного анализа являются окончательными и распространяются на всю партию.

Задание 2. Определение влажности лекарственного растительного сырья.

Определите влажность в аналитической пробе №2. Обратите внимание, что следует взять две навески измельченного сырья. Подумайте почему вы начинаете товароведческий анализ с исследования аналитической пробы №2? Рассчитайте влажность сырья и сделайте заключение о соответствии требованиям НД.

НТД для каждого вида сырья устанавливает норму содержания влаги (влажность) не выше определенного значения. Обычно воздушно-сухое сырье содержит 10-14% гигроскопической воды. Повышенное содержание влаги приводит к порче сырья: появляется затхлый запах, плесень, разрушаются действующие вещества.

Под влажностью сырья в товароведческом анализе понимают потерю в массе при высушивании за счет гигроскопической влаги и других летучих веществ.

В ГФ ХI (т. 1, с. 285) для определения влажности в лекарственном растительном сырье принят метод высушивания до постоянной массы при температуре 100-105°С

Методика.

1. Измельчите сырье до размера частиц около 10 мм;

2. Отвесьте 2 навески сырья массой по 3,0-5,0 г каждую на аналитических весах с точностью 0,01 г.

3. Поместите каждую навеску в предварительно высушенный и взвешенный фарфоровый тигель.

4. Поместите тигли с сырьем в сушильный шкаф при t = 105°C.

Первое взвешивание листьев трав и цветков проводят через 2ч, корней, корневищ, коры, плодов, семян и других видов сырья – 3 ч.

(Время высушивания отсчитывают с того момента, когда температура в сушильном шкафу вновь достигнет 105°C)

5. Тигли с сырьем после высушивания остудите в эксикаторе и вновь взвесьте на аналитических весах.

Высушивание проводят до постоянной массы.

Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последующими взвешиваниями после 30 мин высушивания и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает 0,01 г.

6. Рассчитайте влажность сырья по формуле:

За окончательный результат определения принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, вычисленных до десятых долей процента. Допустимое расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 0,5%.

Задание 2. Определение степени измельченности.

Определите измельченность ЛРС в аналитической пробе №1. Сделайте вывод о соответствии данного сырья требованиям ГФ. Допустимая норма содержания измельченных частиц для каждого вида сырья указана в частной статье на данное лекарственное сырье.

Методика определения измельченности лекарственного растительного сырья описана в ГФ т. 1 с. 275.

Методика.

1. Пробу сырья поместите на сито, указанное в соответствующей НТД и осторожно просейте, не допуская дополнительного измельчения. Просеивание считается законченным, если количество сырья, прошедшего сквозь сито при дополнительном просеве в течение 1 минуты, составляет менее 1% сырья, оставшегося на сите.

2. Для цельного сырья частицы, прошедшие сквозь сито, взвесьте и вычислите их процентное содержание к массе аналитической пробы. Взвешивание проводят с погрешностью ±0,1 г массе аналитической пробы свыше 100 г и ±0,5 г при массе аналитической пробы 100 г и менее.

Задание 4. Определение содержания примесей.

Определите содержание примесей в аналитической пробе и сделайте вывод о соответствии нормам НД.

Примеси – посторонние части растений и предметы, попадающие в сырье в процессе заготовки и сушки. Стандарты допускают определенный процент примесей для каждого вида сырья.

Примеси в ЛРС делятся на органические и минеральные, допустимые и недопустимые.

Органические примеси представляют собой:

- части того же растения, не соответствующие данной НД;

- примеси других (неядовитых) растений;

- части, утратившие окраску;

- измельченные части, образующие при сушке, упаковки и транспортировке (Например, осыпавшиеся цветочные корзинки).

Минеральные примеси чаще попадают в результате сбора и обработки (песок, земля, пыль, камешки).

К недопустимым примесям относятся:

- ядовитые растения;

- металлические предметы;

- стекло;

- помет птиц и грызунов;

- другие похожие растения.

Методика определения определение содержания примесей в лекарственном растительном сырье описана в ГФ т. 1 с. 276.

Методика.

1. Оставшуюся часть аналитической пробы после отсева измельченных частиц (для цельного сырья) поместите на чистую гладкую поверхность и пинцетом выделите примеси, указанные в НД на лекарственное растительное сырье.

Обычно к примесям относят:

- части сырья, изменившие свою окраску (побуревшие, почерневшие, выцветшие и др.);

- другие части этого растения, не соответствующие установленному описанию сырья;

- органическую примесь (части других неядовитых растений);

- минеральные примеси (земля, песок, камешки).

2. Взвесьте отдельно каждый вид примеси и рассчитайте содержание каждого вида примесей в процентах (Х) по формуле:

Задание 5. Определение степени зараженности амбарными вредителями в сырье.

Рассмотрите специальную пробу ЛРС на наличие вредителей, сделайте вывод о степени заражения сырья вредителями и о его дальнейшем использовании.

Исследование на наличие амбарных вредителей проводят в обязательном порядке при приемке лекарственного растительного сырья, а также ежегодно при хранении. К амбарным вредителям относятся клещи (например, клещ мучной (roglyphus farinae L.), клещ волосатый (Glyciphagus destructor hrank.), клещ хищный (Cheyletus eruditus Schrank.), сухофруктовый клещ (Carpoglyphns lactis L.) и д.р.), точильщики, н-р, хлебный точильщик (Sidotrepa panicea L.) долгоносики, амбарная моль (Tinea granlla L.) и другие насекомые.

Методика определения степени зараженности лекарственного растительного сырья амбарными вредителями описана в ГФ т. 1 с. 276.

Методика.

1. Аналитическую пробу сырья просеивают сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм. В сырье, прошедшем сквозь сито, проверяют наличие клещей. В сырье оставшемся на сите, - наличие моли, точильщика, и их личинок и других живых, и мертвых вредителей.

2. Количество найденных вредителей и их личинок пересчитывают

на 1 кг сырья и устанавливают степень его зараженности.

В случае обнаружении в лекарственном растительном сырье амбарных вредителей его подвергают дезинсекции, после чего просеивают сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм (при зараженности клещами) или с диаметром отверстий 3 мм (при зараженности другими вредителями).

После обработки сырье используют в зависимости степени зараженности. При I степени сырье может быть допущено к медицинскому применению, при II степени и в исключительных случаях при III степени зараженности сырье может быть использовано для переработки с целью получения индивидуальных веществ.

Задание 6. Определение общей золы в сырье.

Определите содержание золы в исследуемом образце ЛРС, используя аналитическую пробу №3. Обратите внимание на необходимость проведения двух параллельных определений.

Общая зола – это остаток несгораемых неорганических веществ, оставшихся после сжигания и прокаливания сырья.

Значение данного показателя зависит от степени загрязненности лекарственного растительного сырья различными минеральными примесями (песок, пыль и т. д.) и от содержания минеральных веществ лекарственным растением.

Для всех видов сырья определяют содержание общей золы, а для сырья используемого для приготовления настоев и отваров – содержание золы, нерастворимой в 10% соляной кислоте. Эта зола состоит в основном из оксида кремния и характеризует загрязненность сырья посторонними минеральными примесями.

Методика определения определение содержания золы в лекарственном растительном сырье описана в ГФ т. 2 с. 24-25.

Определение общей золы в сырье

Методика.

1. Измельчите сырье до размера частиц около 10 мм;

1. Взвесьте на аналитических весах пустой тигель;

2. Поместите в пустой тигель около 3-5 г измельченного сырья и взвесьте с точностью 0,0001г;

3. Сожгите сырье при низкой температуре, чтобы не произошло сплавления частиц сырья. А затем поместите тигель в муфельную печь при t = 500°C и прокалите в течение 20 минут. При неполном сгорании частиц угля остаток охлаждают, смачивают водой или насыщенным раствором аммония нитрата, выпаривают на водяной бане и остаток прокаливают. В случае необходимости такую операцию проводят несколько раз.

4. Для остывания поместите тигель с образовавшейся золой в эксикатор и остудите до комнатной температуры;

5. Взвесьте тигель с золой на аналитических весах;

6. Рассчитайте общую золу по формуле:

7. Сравните полученное значение общей золы со стандартом, указанным в ГФ XI на данный вид сырья. Сделайте вывод о доброкачественности исследуемого сырья по содержанию общей золы.

Задание 7. Определение золы, не растворимой в хлористоводородной кислоте.