НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ

ГАОУ ВО «НИЖЕГОРОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

УНИВЕРСИТЕТ ИМ. Н.И. ЛОБАЧЕВСКОГО»

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

Институт биологии и биомедицины

Кафедра физиологии и биохимии человека и животных

Изучение метода приготовления, фиксации и окраски мазков крови

Отчет по зимней

производственной практике

студентки 3 курса группы 0132-3

Подковыриной Маргариты Владимировны

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Корягин Александр Сергеевич

Нижний Новгород

Введение

В настоящее время в мире, и в России в частности, отмечается постоянный рост абсолютного числа онкологических больных. Злокачественные новообразования по-прежнему продолжают занимать одно из ведущих мест в структуре причин смертности населения Российской Федерации наряду с сердечно - сосудистыми заболеваниями и травмами. Поэтому изучение опухолевого роста, в частности, опухоли РС-1, является актуальным.

Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе - это один из самых популярных методов окрашивания бактерий, простейших, а так же клеточных структур и тканей самых различной структуры. Данный метод используется в том числе и для исследований крови посредством световой оптической микроскопии. Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего. Использование краски Романовского (азура) дало начало новой эпохе в развитии гематологии, позволяя изучать морфологию элементов в мазках крови и костного мозга.

Целью работы является освоение метода приготовления, фиксации и окраски мазков крови.

Поставленные задачи:

1. Изучить характеристики перевиваемой опухоли РС-1.

2. Освоить метод приготовления, фиксации и окраски мазков крови.

Глава 1. Характеристика опухоли РС-1

1.1. Опухоль РС-1, её характеристика и использование

Штамм опухоли РС-1 является моделью перевиваемого слизистого рака желчных протоков. При вскрытии животных на 27-30 день после перевивки опухоли РС-1, обнаруживались опухолевые поражения в виде достаточно плотных бело - желтых желеобразных узелков или шариков. В разрезе опухоль демонстрировала ячеистую структуру, иногда встречались участки некроза и кровоизлияний, а также зоны гнойного воспаления. Окружающая опухоль ткань внешне не отличалась от нативной ни у самок, ни у самцов крыс.

Гистологическое исследование опухоли РС-1 подтвердило развитие слизистого холангиоцеллюрярного рака РС-1. Опухоль РС-1 представляет собой солидный рак с участками слизеобразования: ткань опухоли состоит и солидных ячеек опухолевых клеток, представляющих собой кластеры из нескольких клеток или отдельные клетки, взвешенные в слизистом секрете (Рис. 1). Ячейки обычно отделены друг от друга прослойками соединительной ткани. Клетки неоплазмы отличаются у самцов и самок крыс. Клетки опухоли у самок обычно больше в размере, чем у самцов, с хорошо заметным ядром. Границы между клетками просматриваются плохо. Основное пространство внутри клетки заполнено огромными вакуолями со слизью. Цитоплазма клетки оттеснена вакуолями в основном к периферии клетки и связана с участками околоядерной цитоплазмы цитоплазматическими тяжами. Ядра клеток обычно располагаются в центре, но могут быть и оттеснены к периферии (Малюгина, 1958, Трещалина и др., 2001).

Ортотипическая опухоль печени РС-1 может быть использована для оценки эффективности системной и регионарной терапии. Модели опухолевых плевритов ОП/Р-388 и ОП/ELD, охарактеризованные по чувствительности к химиотерапии, могут быть использованы для скрининга и доклинического изучения новых противоопухолевых препаратов (Андронова Н.В., Колбяков В.А., Трещалина В.А., Райхлин Н.Т., 2001).

Глава 2. Приготовление, фиксация и окраска мазков крови.

2.1. Приготовление мазков

Мазки крови делают на чистых обезжиренных предметных стеклах с помощью стекла с отшлифованным краем. Каплю крови наносят на предметное текло на расстоянии 1-1,5 см от края. Размер капли в диаметре должен быть 2-3 мм. Предметное стекло держат на столе. Правой рукой приставляют стекло с отшлифованным краем к капле под углом 45⁰ . Когда вся кровь распределится между стеклами, стекло с отшлифованным краем продвигают по предметному стеклу, пока капля крови не будет исчерпана. Правильно сделанный мазок имеет равномерную толщину, желтоватый цвет, на конце оканчивается щеточкой.

2.2. Фиксация мазков

Принцип метода:

Обработка мазков фиксирующими жидкостями, придающими форменным элементам стойкость по отношению к содержащейся к краске воде, которая без фиксации мазков гемолизирует эритроциты и изменяет строение лейкоцитов. Кроме того, фиксация вызывает коагуляцию белков и прикрепляет препарат к стеклу

Реактивы:

96⁰ спирт

Ход работы:

Высохшие на воздухе мазки крови укладывают на мостик, состоящий из двух стеклянных палочек. Затем мазок заливают спиртом на 5 минут. По окончанию срока фиксации препараты ополаскивают дистиллированной водой и укладывают мазками кверху на мостик для окраски.

2.3. Окраска мазков по Романовскому

Принцип метода:

Окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки смесью основных (азур) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок.

Реактивы:

Раствор для окраски мазков приготавливают либо из готового раствора краски Романовского, либо из сухой краски Романовского (Гимзы) следующим образом: 3,8 г сухой краски Романовского растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта. Раствор оставляют на 3-5 суток, часто взбалтывая для лучшего растворения краски. Затем прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3-5 суток, периодически взбалтывая. Приготовленная таким образом краска хорошо сохраняется длительное время в темных бутылках в шкафу, где нет ни кислот, ни щелочей.

Из концентрированной краски Романовского перед началом работы готовят рабочий раствор путем разбавления его дистиллированной водой (1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды).

Ход работы:

Фиксированные мазки укладывают на мостик. Затем мазки заливают разведенной краской, которую наливают на мазок возможно более высоким слоем. Окрашивание длится в зависимости от температуры воздуха в помещении от 25 минут до 45 минут.

После окончания окраски краску смывают (но не сливают) струей воды и ставят мазки для просушивания.

Цитируемая литература

1. Андронова Н.В., Колбяков В.А., Трещалина В.А., Райхлин Н.Т. Вопросы онкологии. М., 2001.

2. Остроухова Т. Ю. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в опухолях печени разного клеточного происхождения: Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук. М., 2008.

3. http://micromed.pro/articles/metod-okraski-mikropreparatov-po-romanovskomu-gimze.html

Поиск по сайту: