Приготовление реакционной смеси для генотипирования в высоком разрешении

Приготовление реакционной смеси выполняется в ПЦР-боксе зоны «пре-ПЦР приготовление смеси»

1. Буфер GL Plus и Taq-полимеразу разморозить и установить в предварительно охлаждённый штатив для приготовления реакционной смеси;

2. В пробирку с буфером GL Plus добавить 608 мкл бидистилированной воды и Taq-полимеразы в количестве 7 мкл, тщательно перемешать;

3. 10 мкл полученной смеси внести в лунку 12А планшеты – «отрицательный контроль»;

4. Добавить 125 мкл исследуемой ДНК в реакционную смесь, тщательно перемешать;

5. В 95 лунок планшета внести по 10 мкл реакционной смеси с помощью электронного дозатора;

6. Тщательно запечатать лунки пленкой для планшета.

Приготовление реакционной смеси для генотипирования в базовом разрешении

Приготовление реакционной смеси выполняется в ПЦР-боксе зоны «пре-ПЦР приготовление смеси»

1. Буферы D и Y и Taq-полимеразу разморозить и установить в предварительно охлаждённый штатив для приготовления реакционной смеси;

2. В пробирку (1,5 мл) пипетировать Буфер D в количестве 280 мкл, Буфер Y в количестве 560 мкл и Taq-полимеразу в количестве 6,5 мкл, тщательно перемешать;

3. 10 мкл полученной смеси внести в лунку 12А планшеты – «отрицательный контроль»;

4. Добавить 200 мкл исследуемой ДНК в реакционную смесь, тщательно перемешать;

5. В 95 лунок планшета внести по 10 мкл реакционной смеси с помощью электронного дозатора;

6. Тщательно запечатать лунки планшета колпачками.

Электрофорез продуктов амплификации в базовом разрешении

Электрофорез продуктов амплификации выполняется в зоне «пост-ПЦР электрофорез»

1. Для приготовления электрофоретического геля необходимо собрать заливочный стол и выставить горизонтальный уровень;

2. К 200 мл буфера добавить 4 грамма сухой агарозы и в жаропрочной посуде поставить в микроволновую печь до закипания;

3. В горячий гель внести 10 мкл бромистого этидия, аккуратно перемешать и залить полученный раствор в заливочный столик;

4. После остывания помесить гель в камеру для электрофореза, затем заполнить камеру буфером так, чтобы скрыть гель;

5. Снять защитные колпачки с планшета, пипетировать содержимое планшета в лунки геля.

6. Включить блок питания, установить 200 вольт и продолжительность 20 минут, затем нажать «start»;

7. После электрофореза уложить гель на трансиллюминатор и записать результат;

8. Помесить гель на столик GelDoc-системы, сделать снимок и распечатать его на принтере;

9. Интерпретировать результаты исследования с помощью интерпретационной таблицы (см. Приложение);

10. Результаты исследования внести в протокол.

Поиск по сайту: