Бактериологическая диагностика при стафило-, стрептококковой, синегнойной, шигеллезной инфекциях

Отрицательно – в красный цвет.

Neisseria gonorrhoeae, окраска по Леффлеру (метиленовым синим)

Мазок окрашен в синий цвет. В поле зрения

Видны лейкоциты, в отдельных лейкоцитах

Содержится множество диплококков.

• Большое количество бактерий внутри

Лейкоцитов указывает на незавершенный

Фагоцитоз

Streptococcus pyogenes, чистая культура, окраска по Грамму.

Стрептококки имеют шаровидную форму, в мазке

Располагаются цепочками, парами,

Небольшими скоплениями, по

Граму окрашиваются положительно – в

Фиолетовый цвет

Staphylococcus aureus, чистая культура, окраска по Грамму

Стафилококки

Имеют шаровидную форму, в мазке располагаются скоплениями, напоминающиеми гроздья винограда.

По Граму окрашиваются

Положительно – в фиолетовый цвет

5. туберкулезная полочка \коха\ по Цилю-Нильсену

В поле зрения виды рубиново-красные кислотоустойчивые туберкулезные палочки и

Некислотоустойчивые бактерии и элементы

Мокроты, окрашенные в синий и голубой цвет

Капсульные бактерии, окраска по методу Бурри-Гинса

На темном фоне туши видны

Красные бактериальные клетки, окруженные

Неокрашенными бесцветными капсулами

Перечень практических работ:

бактериологическая диагностика при стафило-, стрептококковой, синегнойной, шигеллезной инфекциях.

бакскопич-мазки, бактериологичич-посевы.

В 2этапа

1-выдел-е в чист культ

2-идентификация

1 день-мазок окраска по Грамму-тинкториальн и морфол св-ва.Посев на пит среду

2день-описание культ св-в(высота, величина,цвет, пов-ть,прозр, края, консистенция),Приготовл мазка из чист колоний Накопление ч. культ на скош агаре

3день-описание хар-ра роста чист культ. Посев на пестр ряд

4день-учет биохим св-в и заключение

Это информативный метод, чувств, опред чувств к антибиот, но долго и дорого

Синегнойная палочка -при сепсисе беру материал из раны, при гангрене из раны, мазок по грамму –палочка, на среде накопленя-мясо-пептонном агаре, образуются колонии малоактивные, плохо ферментируют глюкозу, хорошо-белки, есть пигмент пиоцианин имеется запах земляничного мыла, облигатный аэроб, гемолизин-растворяет эритроциты, желатиназа, лецитиназа, экзотоксин А, патогенность обусловлена слизью капсулоподобного в-ва защищающего от фагоцитоза, чувствителен к антибиотикам. Шигеллы –, факультативный анаэроб. Растёт на простых питательных средах (например МПА, МПБ), обладает более слабой способностью к сбраживанию углеводов, чем другие энтеробактерии. Сбраживает глюкозу с образованием кислоты, лактозу и галактозуне сбраживает. Посевы испражнений проводят параллельно на селективное среду Плоскирева для получения изолированных колоний и обязательно в селенитовый бульон с целью накопления шигелл, если их мало в исследуемом материале. Бактериологической петлей выбирают слизисто-гнойные кусочки, тщательно прополаскивают их в 2-3-х пробирках с изотоническим раствором хлорида натрия, наносят на среду Плоскирева и стеклянным шпателем втирают в агар на небольшом участке. Затем отрывают шпатель от среды и втирают им остаточный материал насухо в остальное незасеянный поверхности. При посеве в 2-3 чашки в каждую из них наносят новую порцию посевного материала. В селенитовый бульон кусочки слизи и гноя сеют без полоскании. При отсутствии слизисто-гнойных кусочков фекалии эмульгируют в 5-10 мл 0,85% раствора хлорида натрия и 1-2 капли надосаду засевают на среду Плоскирева. В селенитовый бульон сеют неэмульгированных стул в соотношении 1:5. При посеве рвотных масс и промывных вод используют селенитовый бульон двойной концентрации и обеспечивают соотношение посевного материала к среде 1:1. Засеяны у постели больного питательные среды непосредственно помещают в термостат. Все посевы выращивают при 37 ° С в течение 18-20 час. На второй день невооруженным глазом или с помощью лупы 5х-10х исследуют характер роста на среде Плоскирева, где шигеллы образуют мелкие, прозрачные, бесцветные колонны. Шигеллы Зонне могут давать колонны двух видов: одни плосковатые с зазубренными краями, другие - круглые, выпуклые, с влажным блеском. 3-4 колонии микроскопируют, дослидттоть вс рухливирть и пересевают на cepeдoвище Олькеницького для выделения чистой культуры На третий день учитывают характер роста на среде Олькеницького. Шйгелы вызывают характерные изменения трицукрового агара (желтеет столбик, цвет скошенной частицы не меняется, почернение отсутствует)

Стафилококки – Бактериоскопия мазков проб
S. aureus: шарообразные клетки диаметром 0,5–1,0 мкм, располагающиеся единично, парами и скоплениями. Некоторые штаммы имеют капсулу или псевдокапсулу.
S. epidermidis: клетки правильной круглой формы диаметром 0,5– 1,5 мкм, располагаются преимущественно парами или тетрадами.
S. saprophyticus: клетки располагаются единично, парами, редко – тетрадами.
На неселективных питательных средах стафилококки в течение 24 ч инкубации образуют выпуклые гладкие колонии с ровными и просветленными краями диаметром 1–3 мм, а при продолжении инкубации до 3 сут – диаметром до 3–8 мм.
На ДНК-азном агаре с толуидиновым синим колонии коагулазопозитивных стафилококков окружены зоной розового цвета. На ДНК-азном агаре эти зоны просветлены и бесцветны.
S. aureus в бульонных средах растет со стабильным равномерным помутнением среды и образованием компактного, легко суспендируемого осадка. На плотных питательных средах формирует круглые, выпуклые, гладкие, блестящие, непрозрачные колонии, диаметр которых достигает 6–7 мм (колонии капсулообразующих штаммов мельче – 2–2,5 мм), окрашенные в золотистый, кремовый, желтый или оранжевый цвета.
Пигментообразование сильнее выражено при достаточном доступе кислорода на средах с кровью или сывороткой крови, молоком и углеводами. Пигмент стафилококков не растворим в воде, поэтому окрашивается только сама колония, а не среда вокруг нее. На солевом агаре с маннитом образует колонии, окруженные желтой (коагулазонегативные стафилококки – красной или пурпурной зонами). На среде Байрда–Паркера формирует черные, блестящие с узкой серо-белой полоской колонии, окруженные прозрачной зоной.

бывают коагулазо+(St. aureus) и –(St. Hominis intermedius haemolyticus). есть капсула, белок А-против фагоцитоза, лейкоцидин-уничтожает макрофагов, гемолизин- альфа и бета активность, энтеротоксин-вызывают, плазмокоагулаза-сгусток вокруг микроба, лецитиназа- расщепляют лецитин оболочки эритроцитов, гиалуронидаза-действует на соединительные ткани, фибринолизин- лизирует сгусток плазмы. Определяют видовую принадлежность, для ауреус –плазмокуагулазу, гемолизин, А-протеин.

Стрептококки – гной, слизь из зева, моча- окраска по грамму, посев на кровяной агар, классифицруют по отутствию или наличию гемолиза, идентификация по Аг св-вам в р-и преципитации к серотипам A B D, при подозрении на сепсис посевы крови. Серологическое исследование для подтверждения ревматизма- определяют наличие ат к О-стрептолизину в РСК или преципитеции, а также С-реактивного белка.

Микроскопический метод диагностики при менингококковой, гонорейной инфекции, туберкулезе, при гнойно-воспалит заболеваниях (клебсиелла, синегнойная палочка, протей, кишечная палочка)

Менингит - спинно-мозовая жидкость или слизь из носоглотки при обследовании на бактерионосительство, кровь-сепсис, органы умерших от инфекции. Материал нужно как можно быстрее на исследование т.к. менингококки лабильны. Спинно-мозг жидкость –2 мазка из жидкисти со дна при стоянии, 1-метилен синим-2 по грамму. По грамму не красится,метилен. синим-гр-диплококки, неподвижны, не имеет спор, не образует капсул.

Гонорея - отделяемое уретры, метиленоаой синью и по грамму.гр- диплококки внутри лейкоцитов.

Туберкулез -1)микроскопия-DS не ставится на его основании и даже при обнаружении в материале нужен рентген, только в случае открытой формы обнаружат. Делают микроскопию, но при количестве в 1мл 10 в 5 степени не обнаружится этим методом. Использую р-ю гомогенизации т.е. с помощью 1% едкого натра. Р-ю флотации после гомогензации прогревают 30 мин температура-55, добавляют дистиллированную воду, встяхивают, отстаивают и исследуют всплывший материал красят по цилю-нильсену. 2)бактериологический-на среде Ленштейна-Енсена рост от 3 нед до 3 мес. Колонии сухие, морщинистые, изучают биохим св-ва. 3) биологический метод-заражают материалом морских свинок т.к. они восприимчивы к 1 туб. палочке.4) иммуноферментный анализ. 5) генетические методы-ЦПД и ДНК-зондирование.

Гнойно-воспалит. –красятся по грамму.

Поиск по сайту: