Иммунологические реакции при серологической диагностике инфекционных заболеваний: РСК, РНГА, РТГА , инфекционный и поствакцинельный Видаль, реакция Вассермана

Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), те происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным. PCK проводят в две фазы 1-я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент, 2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

РСК- не протекает в организме. Использ. для обнаруж Ат. Опытная система-Аг Ат и С. Индикаторная система-гем сыв и эр барана. титр Аг-наиб кол Аг при котором гемолиз. Титр С –мин кол-во при котором полн гемолиз.Исполз для клещ энцеф.Если р-я при 0.2-это титр а 0.25-рабочая доза, т.е. 25% от титра. При наличии свобод С-гемолиз, а положит рез-т отстствие видимых измен. Интенсивность задержки гемолиза обозначают знаками ++++.Реакция специфична и чувств, использ для серодиагност.

РНГА (реакция непрямой гемаг)-нагружают эритроциты, можно латекс или уголь и белок А стафилококка., ищут Ат. Нагруженные Аг эритроциты+исследуемая сыв=агглютинация.

РТГА (реакция торможение гемаглютинации) для обнаружения Ат в сыворотке вольного и типа вируса. Сыв разводят 1:5 +в каждую по 0,25 мл суспензии вируса, содержащей 4 гемагглютинирующие дозы вируса(1 ед-наибольшее разведение которое возвают полную агглютинацию эритроцтов.) +эритроциты. Если сыв нейтр. вирус то + р-я задержки.

Видаль - берут 4 ряда пробирок по 6 в каждом. По 1 мл сыв разведения 1:100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1:200 во ворую, 1:400, и т.д. в шестую-1 мл физиологич р-ра. Во все пробирки 1 ряда по 1-2 капле брюшнотфозного Н-диагностикума, 2 по брюшнотифозного О –дагностикума, 3-А-паратифозеой и В- паратифозый диагносткуумы. В термостат на 2 часа. Взбудитель-тот котрый агглютинирует, р-я положит если агглют-я хотя бы в 1:100.если агглют-я с несколькими то возбудитель тот где агглют-я с большим разведением.если агг-я с одинаковыми титрами, тонужна р-я адсорбции аглюининов по методу Кастеллани. Для дифферинциации прививочного и анамнестического прибегают к повторной постановке через 5-6 дней, если болен-то кол-во Ат увеличится, если нет останется прежним.

Вассерман –сифилис, сыв больного(Ат)+известный Аг(липоидные экстракты из ор-в животных)+комплемент + гемолит сыв+эр барана+физ раствор. Неспецичич Аг-вытяжки из органов, неспецифич Аг-из больного органа. Если нет гемолиза то,,+,, и чем больше плюсов тем боьше вероятность болезни.

5.

Примером неконкурентного формата ИФА является «сэндвич»-метод. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации на первой стадии на твердой фазе образуется комплекс антиген-антитело. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом специфические антитела. После вторичной инкубации и удаления избытка конъюгата антител с ферментом определяют ферментативную активность носителя, которая пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена. На стадии выявления специфического иммунокомплекса антиген оказывается как бы зажатым между молекулами иммобилизованных и меченных антител, что послужило поводом для широкого распространения названия «сэндвич»-метод. Ферментативная реакция (цветная реакция) проходит в присутствии перекиси водорода и субстрата, представленного неокрашенным соединением, которое в процессе пероксидазной реакции окисляется до окрашенного продукта реакции на заключительном этапе проведения исследования. Интенсивность окрашивания зависит от количества выявленных специфических антител. Результат оцениваетсяспектрофотометрически

«Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две антигенные детерминанты. На этом формате основано большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции.

Поиск по сайту: