|
|||||||
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция |
Постановка прямой и непрямой РИФПрактические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
Алгоритм постановки прямой РИФ На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей - мазки-отпечатки. Препараты подсушивают, фиксируют, наносят на них люминесцирующую сыворотку, взятую в рабочем разведении, и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С). Затем для удаления избытка флюоресцирующих антител препарат промывают в забуферном изотоническом растворе натрия хлорида в течение 10 – 15 мин с последующим ополаскиванием в дистиллированной или проточной воде в течение 10 мин. Сушат при комнатной температуре и просматривают с использованием люминесцентного микроскопа и масляной иммерсионной системы. Интенсивность специфической реакции флюоресценции бактериальных клеток оценивают по четырехплюсовой шкале: "++++" - очень яркая; "+++" - яркая; "++" - выраженная ободочная флюоресценция; "+" - слабое свечение клеток. Обязательны три контроля обработки флюоресцирующими антитела суспензии: 1) гомологичных бактерий (положительный контроль 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).
Алгоритм постановки непрямой РИФ На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей - мазки-отпечатки. Препараты подсушивают, фиксируют, наносят на них обычную специфическую сыворотку, взятую в рабочем разведении, и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С). Затем для удаления избытка антител препарат промывают в забуферном изотоническом растворе натрия хлорида в течение 10 – 15 мин с последующим ополаскиванием в дистиллированной или проточной воде в течение 10 мин. Препараты подсушивают, наносят на них флюоресцирующую антииммуноглобулиновую (специфически взаимодействующую с иммуноглобулинами человека) сывортку, взятую в рабочем разведении, и снова помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С). Сушат при комнатной температуре и просматривают с использованием люминесцентного микроскопа и масляной иммерсионной системы. Интенсивность специфической реакции флюоресценции бактериальных клеток оценивают по четырехплюсовой шкале: "++++" - очень яркая; "+++" - яркая; "++" - выраженная ободочная флюоресценция; "+" - слабое свечение клеток. Обязательны три контроля обработки флюоресцирующими антитела суспензии: 1) гомологичных бактерий (положительный контроль 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).
Алгоритм постановки твердофазного иммуноферментного анализа.
В настоящее время чаще применяется твердофазная модификация ИФА, при этом антитела или антигены сорбируются в лунка: полистироловых планшет (на твердой фазе). В большинстве случаев к твердой фазе присоединяются антигены, которые при инкубации с сыворотками пациентов улавливают специфические антитела. К образовавшемуся при этом иммунокомплексу прибавляются затем меченные пероксидазой антииммуноглобулиновые антитела, специфические к антителам человека – антииммуноглобулиновая сыворотка. В результате образуется иммунопероксидазный тройной комплекс, при добавлении к которому ортофенилендиамина (хромогена) и Н202 в качестве субстрата для пероксидазы происходит пожелтение в лунке (изменение цвета хромогена вследствие образования супероксиданиона кислорода в результате расщеплении пероксида пероксидазой). Результаты твердофазной модификации ИФА учитывают с использованием специального спектрофотометра. Поиск по сайту: |
Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.007 сек.) |