АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Постановка прямой и непрямой РИФ

Читайте также:
  1. I. Постановка задачи маркетингового исследования
  2. III Угол между прямой и плоскостью.
  3. В чём физиологический смысл наличия прямой и обратной связей?
  4. Взаимное положение прямой линии и плоскости
  5. Взаимное расположение прямой и плоскости
  6. Взаимосвязь модели САРМ с линией рынка капитала и характеристической прямой
  7. Г) ледокольный ; д) прямой.
  8. Г) обратный, комбинированный, прямой
  9. Заболевания прямой и оболочной кишки
  10. ЗАДАНИЕ 6 . Постановка задачи математического программирования
  11. ЗНАКИ ПРЕПИНАНИЯ ПРИ ПРЯМОЙ РЕЧИ
  12. Изображение прямой

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

  1. Знать алгоритм постановки прямой и непрямой реакции иммунофлюоресценции (РИФ).
  2. Знать алгоритм постановки твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
  3. Уметь оценить показатели иммунограммы и знать, как расшифровать следующие сокращения: CD, ИРИ, ФЧ, ФИ, CH50, ЦИК, НСТ, Ig, РБТЛ, ФГА, ЛПС и КонА.

 

Алгоритм постановки прямой РИФ

На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей - мазки-отпечатки.

Препараты подсушивают, фиксируют, наносят на них люминесцирующую сыворотку, взятую в рабочем разведении, и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С).

Затем для удале­ния избытка флюоресцирующих антител препарат промывают в забуферном изотоническом растворе натрия хлорида в течение 10 – 15 мин с последующим ополаскиванием в дистиллированной или проточной воде в течение 10 мин.

Сушат при комнатной температу­ре и просматривают с использованием люминесцентного микроскопа и масляной иммерсионной системы.

Интенсивность специфической реакции флюоресценции бактериальных клеток оценивают по четырехплюсовой шкале:

"++++" - очень яркая; "+++" - яркая; "++" - выражен­ная ободочная флюоресценция; "+" - слабое свечение клеток.

Обязательны три контроля обработки флюоресцирующими антитела суспензии:

1) гомологичных бактерий (положительный контроль 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).

 

Алгоритм постановки непрямой РИФ

На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей - мазки-отпечатки.

Препараты подсушивают, фиксируют, наносят на них обычную специфическую сыворотку, взятую в рабочем разведении, и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С).

Затем для удале­ния избытка антител препарат промывают в забуферном изотоническом растворе натрия хлорида в течение 10 – 15 мин с последующим ополаскиванием в дистиллированной или проточной воде в течение 10 мин.

Препараты подсушивают, наносят на них флюоресцирующую антииммуноглобулиновую (специфически взаимодействующую с иммуноглобулинами человека) сывортку, взятую в рабочем разведении, и снова помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С).

Сушат при комнатной температу­ре и просматривают с использованием люминесцентного микроскопа и масляной иммерсионной системы.

Интенсивность специфической реакции флюоресценции бактериальных клеток оценивают по четырехплюсовой шкале:

"++++" - очень яркая; "+++" - яркая; "++" - выражен­ная ободочная флюоресценция; "+" - слабое свечение клеток.

Обязательны три контроля обработки флюоресцирующими антитела суспензии: 1) гомологичных бактерий (положительный контроль 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).

 

 

Алгоритм постановки твердофазного иммуноферментного анализа.

 

В настоящее время чаще применяется твердофазная модификация ИФА, при этом антитела или антигены сорбируются в лунка: полистироловых планшет (на твердой фазе).

В большинстве случаев к твердой фазе присоединяются анти­гены, которые при инкубации с сыворотками пациентов улавливают специфические антитела.

К образовавшемуся при этом иммунокомплексу прибавляются затем меченные пероксидазой антииммуноглобулиновые антитела, специфические к антителам человека – антииммуноглобулиновая сыворотка.

В результате образуется иммунопероксидазный тройной комплекс, при добавлении к которому ортофенилендиамина (хромогена) и Н202 в качестве субстрата для пероксидазы происходит пожелтение в лунке (изменение цвета хромогена вследствие образования супероксиданиона кислорода в результате расщеплении пероксида пероксидазой).

Результаты твердофазной модифика­ции ИФА учитывают с использованием специального спектрофотометра.


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |

Поиск по сайту:



Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.003 сек.)