АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Белков методом коагуляции»

Читайте также:
  1. Азотной кислоты методом прямого синтеза
  2. Визначення похибок обробки методом математичної статистики
  3. Главная причина осложнений—гликозилирование белков.
  4. Знаходження умовного екстремуму функції багатьох змінних за методом Лагранжа
  5. Значение белков плазмы
  6. ИНСТРУМЕНТЫ И АППАРАТУРА, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ПЕРЕЛОМОВ КОНЕЧНОСТЕЙ МЕТОДОМ ВЫТЯЖЕНИЯ
  7. Исследование белкового состава мяса для установления его видовой принадлежности (методами изоэлектрофокусирования и вертикального SDS–электрофореза).
  8. к определению активного хлора в препаратах для обеззараживания воды полевым (капельным) методом
  9. Лицензии о заклании исламским методом
  10. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
  11. Найбільш ефективним методом захисту від електромагнітних випромінювань є встановлення відбиваючих або поглинаючих екранів.

Цель работы: Определить изоэлектрический пункт белков методом коагуляции.

Материальное обеспечение: Пробирки, пипетки на 2.5 мл, стаканы, солевой раствор мышечного глобулина 1% р-р, желатины, pH – метр.

Реактивы: 90 % спирт, буферные смеси.

Формирование компетенций: ОК-1, ОК-4, ПК-1.1, ПК-1.2, ПК-2.2, ПК-6.1.

Ход работы:

Коллоидные растворы белковых амфолитов обладают в изоэлектрическом пункте минимальной стабильностью. Для некоторых белков эта минимальная устойчивость коллоидных растворов сказывается в том, что в изоэлектрическом пункте самопроизвольно коагулируют; другие белки в этом пункте легко коагулируют при добавлении какого - либо осадителя. Это свойство белковых р-ров служит основанием для нижеследующего метода определения изоэлектрического пункта.

1. Определение изоэлектрического пункта желатины.

Готовят 7 пробирок и помещают в каждую 5 мл буферных смесей (нитратно -фосфатных), как указано в следующей таблице:

№ пробирки              
№ смеси              
pH 6,8 5,6 5,2 4,8 4,4 4,0 3,6

В каждую пробирку помещают по 2 мл 1% р-ра желатины. В пробирку № 4 добавляют при встряхивании 90% спирт до очень легкого помутнения раствора. Затем в остальные пробирки добавляют такое же количество алкоголя, как в пробирку № 4. После 30-минутного стояния отмечают пробирку с максимальным помутнением и, таким образом, находят pH, отвечающий изоэлектрическому пункту желатины.

2. Определение изоэлектрического пункта мышечного глобулина.

Готовят 8 пробирок и наливают в каждую по 5 мл цитратно – фосфатных буферных смесей следующим образом:

№ пробирки                
№ смеси                
pH 3,4 3,8 4,2 4,6 5,0 5,4 5,8 6,2

 

В каждую пробирку добавляют 1 мл молевого р-ра мышечного глобулина. Отмечают пробирку, в которой после встряхивания получается максимальное помутнение; pH буферной смеси в этой пробирке соответствует изоэлектрическому пункту исследуемого протеина.

 

Оформить отчет в тетради.

 

 

Лабораторная работа № 2

«Проведение гидролиза белка. Разделение свободных аминокислот методом распределительной хромотографии»

Цель работы: Провести реакции гидролиза белка, изучить метод обнаружения аминокислот распределительной хромотографией.

Материальное обеспечение: Пробирки, мерный цилиндр на 10 мл, термостат, фильтровальная бумага.

Реактивы: Физиологический раствор, белок куриного яйца, 0.1 % пепсина, 0.2 % р-р соляной кислоты, лакмойд, разбавленный раствор едкого натра, 4-5% р-р казеина, 0.5 % р-р соды, р-р трипсина, изоамиловый спирт, бромовая вода.

Формирование компетенций: ОК-1, ОК-4, ПК-1.1, ПК-1.2, ПК-2.2, ПК-6.1.

Ход работы:

1. Проведение гидролиза белка.

а) Продукты пептического гидролиза белков:

К 1 мл разбавленного 10 мл 0.1 % р-ра пепсина в 0.2 % соляной кислоте и ставят смесь в термостат при 37 °C на 25-30 минут. После этого к жидкости добавляют несколько капель раствора лакмойда и осторожно разбавленный раствор едкого натра до слабо кислой реакции; при этом выпадает осадок кислотного альбумината, который отфильтровывают. Фильтрат нагревают до кипения, причем выпадает осадок неизмененного белка. Осадок отфильтровывают от еще горячей жидкости и в полученном фильтрате открывают альбумозы и пептоны, как описано ниже.

б) Продукты трипептического гидролиза белков:

20 мл 4-5 % раствора казеина в 0.5 % р-ре соды смешивают с 2-3 мл р-ра трипсина и оставляют в термостате при 37 °C на 30-40 минут. После этого жидкость осторожно подкисляют до слабокислой (на лакмойд) реакции и отфильтровывают выпавший осадок щелочного альбумината. Фильтрат нагревают до кипения, причем выпадает в осадок белок. Жидкость фильтруют еще горячей и в фильтрате открывают альбумозы и пептоны, а затем открывают свободный триптофан, для чего 3-5 мл гидролизата нейтрализуют уксусной кислотой, добавляют 1 мл амилового алкоголя и затем по каплям свежеприготовленную бромовую воду. Хорошо встряхивают. В присутствии триптофана слой амилового алкоголя окрашивается в красно – фиолетовый цвет.

Избыток бромной воды обесцвечивает образующееся окрашенное соединение. Реакцию можно вести также не употребляя амилового алкоголя.

 

2. Открытие свободных аминокислот методом распределительной хромотографии.

Принцип метода заключается в том, что подвижный растворитель смачивая с одного конца полоску фильтровальной бумаги, поднимается и увлекает за собой аминокислоты, которые были нанесены на бумагу. Неподвижной жидкой фазой является вода воздушносухой фильтровальной бумаги, на которую наносят каплю р-ра аминокислот подвижной – растворитель.

Аминокислоты движутся с разной скоростью вследствие того, что неодинаково растворяются в воде и растворителе. Чем выше растворимость аминокислоты в воде, тем меньше она продвинется в направлении движения растворителя и наоборот, чем больше растворяется она в растворителе, чем дальше она поднимается от места нанесения. После продвижения растворителя по длине полосы бумагу высушивают и смачивают р-ром реактива, который с аминокислотами дает цветную реакцию. На бумаге появляются цветные пятна, соответствующие отдельным аминокислотам. Положение пятна, т.е. отношения расстояния его середины от места нанесения испытуемой смеси к расстоянию

фронта растворителя от места нанесения смеси, характерно для каждой кислоты. Эта величина называется коэффициентом распределения. Коэффициент распределения характерен для определенной аминокислоты только в определенных условиях (температуры, сорта бумаги, и растворителя). Для обнаружения аминокислот берут полоску фильтровальной бумаги (шириной 2-2.5 см, длиной 20-25 см). На одном конце, на расстоянии 5-7 см от края, делают простым карандашом кружок диаметром около 5 см, на который наносят капилляром маленькую каплю раствора аминокислот и высушивают ее на воздухе. Полоску бумаги 3 кнопками прикалывают к пробке, которой затем закрывают цилиндр. В цилиндр наливают насыщенного водой фенола столько, чтобы конец бумаги, на который и нанесена капля был погружен в жидкость на 1-2 см; пробку плотно закрывают. Полоска бумаги не должна касаться стенок цилиндра. Цилиндр помещают в термостат на 35-40 °C.

Бумага постепенно смачивается фенолом, когда фронт жидкости пройдет расстояние 10-12 см бумагу вынимают и высушивают в сушильном шкафу при 100°C. Сухую бумагу опрыскивают р-ром нингидрина и вновь подсушивают в сушильном шкафу в течение 5-6 минут, на бумаге появляется сияние пятна. Измеряют расстояние от места нанесения испытуемого раствора до фронта растворителя и до середины пятен. Вычисляют коэффициент распределения для аминокислот.

 

Оформить отчет в тетради.

 

Лабораторная работа № 3

«Цветные реакции на белки»

Цель работы: Ознакомиться с методикой определения цветных реакций на белки.

Формирование компетенций: ОК-1, ОК-4, ПК-1.1, ПК-1.2, ПК-2.2, ПК-6.1.

Ход работы:


1 | 2 | 3 | 4 |

Поиск по сайту:



Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.004 сек.)