Определение активности липазы в сыворотке крови по Гольдштейну и Рою

Принцип метода. Освободившиеся из расщепляемого липазой трибутирина жирные кислоты отгитровывают щелочью. По разнице в объеме раствора щелочи, которая требовалась на титрование опытной и контрольной проб, судят об активности фермента.

Ход работы.

В колбочки вместимостью 50 мл вносят по 0,2 мл трибутирина, 2,5 мл дистиллированной воды, содержимое встряхивают до получения однородной эмульсии. Затем добавляют по 5 мл раствора ацетата кальция и 5 мл буферного раствора; в опытную (опытные) колбу вносят 0,5 мл сыворотки (или панкреатического сока в разведении 1:50 либо 1:100), тщательно перемешивают и ставят в термостат для выдерживания при 37°С в течение 1 ч. После этого во все колбы добавляют по 5,0 мл инактивирующей смеси, а в контрольную — дополнительно 0,5 мл сыворотки. После перемешивания к содержимому колб приливают 0,5 мл раствора фенолфталеина и производят титрование 0,1н раствором щелочи (NaOH или КОН) до появления устойчивой ярко-розовой окраски (вначале титруют контрольную пробу, затем опытную — до цвета содержимого колбочки с контрольной пробой).

Активность липазы выражают в пересчете на 100 мл сыворотки (панкреатического сока).

1 ед активности фермента — это мера активности, под действием которой за 1 ч инкубации при 37°С из трибутирина высвобождаются жирные кислоты, содержание которых соответствует таковому в 1 мл 0,1н раствора жирной кислоты.

Р а с ч е т. От количества (мл) раствора щелочи, пошедшей на титрование опытной пробы, отнимают объем раствора щелочи (в мл), затраченной на титрование контрольной, и полученный результат умножают на 200. Ответ выражают в единицах активности панкреатической липазы.

П р и м е р. На титрование контрольной пробы ушло 0,4 мл раствора NаОН, а на титрование опытной — 1,2 мл. Расчет: (1,2 мл - 0,4 мл) • 200 = 160 ед (на 100 мл сыворотки крови).

Норма: 60—160 ед в сыворотке крови, 50—1500 ед — в панкреатическом соке (на 100 мл биологической жидкости).

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

Клинико-диагностическое значение определения активности панкреатической липазы.

Повышение активности панкреатической липазы в сыворотке крови отмечено при панкреатите любого происхождения, в особенности — остром панкреатите, при котором активность фермента повышается также в асцитической жидкости. У больных панкреатитом целесообразно одновременно исследовать активность липазы в крови и моче, поскольку в последней она оказывается повышенной чаще, чем в крови.

К преимуществам определения активности липазы в крови относится более длительная гиперлипаземия. То же выявляется у больных карциномой поджелудочной железы и перитонитом.

Увеличение активности фермента в плазме (сыворотке) крови происходит при желчной колике, странгуляции или инфаркте кишки, перфорации полого органа, ожирении, подагре, у части больных сахарным диабетом, а также у страдающих уремией, острой недостаточностью почек (вследствие застоя).

Низкие показатели активности липазы обнаружены у больных туберкулезом, сифилисом, раком, при различных инфекционных заболеваниях, причем по мере прогрессирования патологического процесса активность фермента все более снижается. Лекарственные препараты, провоцирующие спазм сфинктера Одди (наркотические средства, анальгетики, секретин), гепарин (стимулирующий высвобождение липазы) активируют этот фермент.

Таким образом, активность липазы (панкреатической) значительно увеличивается относительно нормы (показатель ее у практически здоровых взрослых людей менее 190 Е/л) при остром панкреатите, задержке желчи в печени (внутрипеченочном холестазе), хроническом панкреатите (обструктивном), недостаточности деятельности почек (когда уровень креатинина в плазме (сыворотке) крови повышается до 0,264 ммоль/л, или 30 мг/л).

III. Рекомендуемая литература

1. Биохимические основы патологических процессов: Учеб. пособие/ Под ред. Е.С. Северина. – М.: Медицина, 2000. – 304с.: ил.
2. Биологическая химия: учебник / В.К. Кухта, Т.С. Морозкина, Э.И. Олецкий, А.Д.

Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ,

2008. – 688с.: ил.

1. Биохимия: Учебник / Под. ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-

Медиа, 2007. – 784с.: ил.

1. Вилкинсон Д. Принципы и методы диагностической энзимологии: Пер. с англ. – М.: Медицина, 1981, 624с., ил.

1. Даниленко Н.Г., Давыденко О.Г. Миры геномов органелл / Н.Г. Даниленко, О.Г.

Давыденко.- Мн.: Тэхналогія, 2003.- 494с.

1. Врожденные и приобретенные энзимопатии/ ПОД РЕД. Т. Ташева: Пер. с болг. – М.: Медицина, 1980, 368с.
2. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: В 2т. Т.1. – Мн.: Беларусь, 2000. – 495с.:ил.
3. Клиническая биохимия/ Под ред. В.А. Ткачука. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. – 360с.: - (серия «ХХIвек»).
4. Николаев А.Я. Биологическая химия. - М.: Медицинское информационное

агентство, 2001.- 496с.: ил.

1. Сборник тестов и задач по биохимии. Учебное пособие/ Под ред. И.П. Ашмарина и А.Я. Николаева. М.: Изд-во МГУ, 1996. – 233с.

Поиск по сайту: