Электрофорез белков

Наиболее распространенным методом фракционирования белков крови является электрофорез.

Ацетатцеллюлозная пленка, гель, специальная бумага (носитель) помещается на рамку, при этом противоположные края носителя свисают в кюветы с буферным раствором. На линию старта наносится сыворотка крови. Метод заключается в движении буферного раствора по поверхности носителя под влиянием электрического поля. Двигаясь, буферный раствор захватывает молекулы белков сыворотки. Молекулы с наибольшим отрицательным зарядом и наименьшим размером, т.е. альбумины, двигаются быстрее остальных. Наиболее крупные и нейтральные (γ-глобулины) оказываются последними.

На ход электрофореза влияет подвижность разделяемых веществ, находящаяся в зависимости от следующих факторов:

· заряд (обычно зависит от pH), размеры и форма молекул веществ,

· электрическое поле: скорость миграции ионов вещества прямо пропорциональна силе тока (обусловлена переносом ионов буфера и образца), напряжению и обратно пропорциональна сопротивлению (зависит от типа и размеров носителя и ионной силы буфера),

· буфер: состав, концентрация, pH и ионная сила, зависящая от концентрации ионов и их заряда,

· носитель: учитывается его гидрофильность, адсорбция веществ на молекулах носителя.

Поиск по сайту: