Посторонних микроорганизмов (упрощенный метод)

Пастеровской петлей, предварительно прокаленной и охлажденной, захватывают комочек дрожжей из середины брикета, переносят в 10 мл стерильной воды и тщательно размешивают.

В три стерильные чашки Петри заранее стерильно разлить нужную питательную среду, каждую чашку накрыть стерильным картонным кружком, затем крышкой. После застывания агара чашки перевернуть. Выдержать 5 мин. В перевернутом состоянии чашку поднять, быстро снять крышку, вытряхнуть картонный кружок и закрыть крышку.

Затем стерильной пипеткой внести 1 каплю дрожжевой суспензии на поверхность питательной среды и растереть каплю шпателем Дригальского. Этим же шпателем остатки материала распределить на поверхность двух оставшихся чашек по методу истощающего посева.

Таким образом произвести посевы на питательную среду из гидролизата рыбной муки. Засеянные чашки поместить в термостат при температуре 30 ºС на 48 часов.

Выросшие колонии подсчитать в тех чашках, где их не более 50 и не менее 20. Рассчитать соотношение основной культуры и посторонних микроорганизмов.

Выявление общего количества бактерий методом высева

на твёрдые питательные среды с нистатином

Общее количество бактерий определяют методом Н.В. Розмановой. Метод заключается в высеве на среды с нистатином. В качестве среды можно использовать дрожжевой агар с 4 % сахарозы, либо сусло-агар с 12 % сухих веществ.

Нистатин представляет собой антибиотик, обладающий ингибирующим действием на дрожжи и сильным противогрибковым действием, при этом он не влияет на рост бактериальной микрофлоры.

Колонии бактерий могут быть сухие, морщинистые или слизистые, плоские или бугристые, компактные или расплывчатые, крупные, беловато- или светло-коричневого цвета. Под микроскопом видны палочки, расположенные по одиночке или цепочками; при окраске бывают видны споры внутри клеток (в центре или на конце), а также неокрашенные овальные или круглые тельца (зрелые споры).

Концентрация нистатина, полностью подавляющая рост дрожжей и дрожжеподобных грибов, равна 20 ед./1 см³ среды (при низкой активности антибиотика до 40…60 ед./1 см³).

Нистатин выпускается промышленностью с активностью равной 2000…3000 ед./1 мг. Имеется две формы нистатина – водорастворимая и спирторастворимая; применять можно и ту и другую форму антибиотика, в первом случае – в виде водной суспензии, во втором – в виде спиртового раствора.

Нистатин нестоек при повышенной температуре и на свету, поэтому его нельзя стерилизовать, но он обычно выпускается стерильным. Хранить нистатин необходимо в темном, холодном месте. В таком виде он сохраняет активность около года. Растворы нистатина нестойки и могут храниться в холодном месте 2…3 суток, затем их активность снижается.

Готовится раствор или суспензия антибиотика в стерильной воде с таким расчетом, чтобы в 0,04 см³ (1 капле) раствора содержалась фунгицидная концентрация, достаточная для подавления роста дрожжей в 1 чашке Петри (в 25 см³ среды).

Примерное количество нистатина можно брать без взвешивания стерильным скальпелем.

В стерильные чашки Петри внести 0,1 см³ раствора антибиотика и далее все операции проводить как обычно. Используют питательную среду из гидролизата рыбной муки. Выращивают посевы при температуре 30 ºС в течение 48 часов. Выросшие колонии подсчитать в тех чашках, где их не более 50 и не менее 20. Рассчитать соотношение количества дрожжей и бактерий.

Выявление кислотообразующих бактерий

Произвести посевы на питательную среду с добавлением 4 % мела. Вокруг колоний кислотообразующих бактерий появляются прозрачные зоны растворения мела диаметром от 0,5 до 2 мм. Засеянные чашки поместить в термостат при температуре 30 ºС на 48 часов.

Выросшие колонии подсчитать в тех чашках, где их не более 50 и не менее 20. Рассчитать соотношение основной культуры и кислотообразующих бактерий.

Выявление спорообразующих бактерий

Для выявления спорообразующих бактерий пробирку с суспензией дрожжей выдерживают 10 мин в кипящей водяной бане, после чего проводят поверхностный истощающий посев. Используют питательную среду из гидролизата рыбной муки.

Выросшие колонии подсчитать в тех чашках, где их не более 50 и не менее 20.

Поиск по сайту: