 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
Приготовление питательных сред
Требования к питательным средам. Среда должна содержать основные питательные вещества, достаточное количество воды, обладать определенным осмотическим давлением, иметь оптимальную концентрацию ионов водорода, быть стерильной и желательно прозрачной. Ингредиенты растворяют согласно указанной последовательности, каждый последующий только после полного растворения предыдущего. рН среды доводят до требуемого уровня до внесения агара, иначе агар забивает электрод рН-метра. Агар вносят в холодную среду, выдерживают для набухания 20-30 мин, затем нагревают до полного растапливания агара и фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Стерилизация сред. Питательные среды разливают в чистую посуду (колбы, бутыли, пробирки) на 2/3 объёма. Агаровые среды разливают в круглые плоскодонные колбы (не конические) во избежание проблем при расплавлении. Физиологический раствор для приготовления разведений проб разливают в пробирки по 10 мл (с учётом того, что при стерилизации 1 мо раствора испрарится) или в колбы по 93 мл. Посуду закрывают ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками. На колпачках записывают название среды и дату приготовления. Среды, предназначенные для автоклавирования текучим паром или при давлении 0,5 атм, разливают в стерильную посуду.
Подготовленные среды стерилизуют в автоклаве при режиме, предписанном для той или иной среды в зависимости от её состава. Агаровые среды, не содержащие термолабильных соединений (углевода, белки и т.п.), стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин.
Для насыщенного (сухого) пара температура стерилизации в зависимости от избыточного давления (таблица 1), а продолжительность стерилизации от объёма (таблица 2).
Таблица 1 – Зависимость температуры стерилизации от избыточного давления
| Режим | Температура, °С |
| Текучий пар | |
| Избыточное давление 0,5 атм | |
| Избыточное давление 1,0 атм | |
| Избыточное давление 1,5 атм |
Таблица 2 – Зависимость продолжительности стерилизации от объёма среды
| Объём среды, мл | Время прогрева, мин |
Необходимо подготовить жидкую синтетическую питательную среду на основе сахарозы, 1500 мл, разливается в 2 колбы ёмкостью 1 л и в 2 колбы ёмкостью 500-750 мл.
Состав питательной среды, г/л:
– глюкоза – 50,0;
– NH4H2PO4 – 2,0;
– KCl – 0,5;
– MgSO4 7H2O – 0,25;
– FeSO4 – 0,15;
– MnSO4 – 0,015;
– дрожжевой экстракт – 5.
Среду стерилизовать 10 мин при 1 атм.
Необходимо приготовить твёрдые агаризованные питательные среды для контроля качества засевных дрожжей упрощенным методом. Для выявления общего количества бактерий – 75 мл питательной среды. В качестве среды можно использовать дрожжевой агар с 4 % сахарозы, либо сусло-агар с 12 % сухих веществ. Для выявления кислотообразующих бактерий – 75 мл такой же среды с добавлением 4 % мела. Для выявления спорообразующих бактерий – 75 мл среды.
Необходимо приготовить твёрдые агаризованные питательные среды для контроля численности молочнокислых бактерий, например среду для КМАФАнМ, 300 мл, разлить в 3 колбы ёмкостью 250 мл. В 24 пробирки наливают физиологический раствор (0,9 %-ный раствор хлорида натрия) по 10 мл (с учётом того, что при стерилизации 1 мо раствора испрарится).
Поиск по сайту: