Ход работы. Цель: Изучить правила работы в микробиологической лаборатории, особенности культивирования микроорганизмов

ЗАНЯТИЕ № 1

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И МЕТОДЫ ИХ СТЕРИЛИЗАЦИИ

ОСОБЕННОСТИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Цель: Изучить правила работы в микробиологической лаборатории, особенности культивирования микроорганизмов, способы приготовления питательных сред и методы их стерилизации.

Задачи

1. Ознакомится с правилами поведения при выполнении микробиологического практикума.

2. Изучить особенности культивирования микроорганизмов.

3. Изучить методы приготовления и разлива питательных сред.

4. Изучить методы стерилизации посуды и питательных сред.

5. Приготовить и разлить питательную среду МПА.

6. Получить накопительную культуру сенной и картофельной палочек.

Литература

1. Аникеев В.В., Лукомская К.А. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М.:Просвещение, – 1983.

2. Гусев М.В. Микробиология: учебник для вузов / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. – Москва, 2004

3. Емцев В.Т. Микробиология: учебник для вузов / В.Т. Емцев, Е.Н. Мишустин. – М.: Дрофа, 2005.

4. Лукомская К.А. Микробиология с основами вирусологии. М.:Просвещение, - 1983.

5. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. / Под. Редакцией Воробьева А.А. и Кривошеина Ю.С. - М.:Мастерство, 2001.

6. Пименова М.Н. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Москва, 1971.

7. Практикум по микробиологии. Под ред. Нетрусова А.И. – М.: Академия, - 2005.

8. Теппер Е.З. Практикум по микробиологии. – М.: Дрофа, 2004.

Материалы и оборудование. Стерильные чашки Петри, стерильные конические колбы на 100-150 мл, агар питательный, пептон, сено, клубни картофеля, мел, плитка, спиртовки, колбы, вата, марля, пипетки, весы, разновесы, термостат.

Основные понятия. Культивирование, культура, поверхностное культивирование, глубинное культивирование, периодическое культивирование, непрерывное культивирование, чистая культура, накопительная культура, посев, инкубация, пассирование, элективные среды, накопительные среды, оптимальные среды, естественные среды, синтетические среды, полусинтетические среды, агар, стерилизация, фламбирование, тиндализация, пастеризация, автоклавирование, МПА.

Ход работы

Задание № 1. Изучить правила работы при выполнении микробиологического практикума.

Задание № 2. Изучить классификацию питательных сред, особенности их приготовления и разлива, методы стерилизации питательных сред и посуды.

Задание № 3. Приготовить и разлить питательную среду МПА в стерильные чашки Петри.

Задание № 4. Получить накопительную культуру сенной палочки (Bacillus subtilis).

Сено мелко на­резают и помещают в колбу объемом 500 мл, заполняя ее на одну четверть объема, добавляют щепотку мела и кипятят 15-20 мин, пока среда не приобретет цвет настоя крепкого чая. Сенной отвар разливают в стерильные конические кол­бы на 100-150 мл слоем 1,0-1,5 см, закрывают ватными пробками и поме­щают в термостат при температуре 22-25 °С.

Через двое суток на поверхности среды развивается бело­ватая пленка Вас. subtilis,которая при старении, на 3-4-е сут­ки, становится серовато-зеленоватой. Другие микроорганизмы при этом вырастают редко и в небольших количествах.

Задание № 5. Получить накопительную культуру картофельной палочки (Вас. subtilis var. mesentericus).

Промытые клубни картофеля, не очищая, нарезают кружоч­ками. Поверхность их натирают мелом для нейтрализации среды и помещают в стерильные чашки Петри на двойной слой фильтроваль­ной бумаги, смоченный дистиллированной водой. Чашки с кар­тофельной средой выдерживают в автоклаве при 0,5 атм в тече­ние 10 мин и ставят в термостат с температурой 27-30°С на 3-4 суток.

На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка культуры картофельной палочки. Окраска пленки может быть разной: беловато-серой, розоватой, желто-бурой, черной, что зависит от разновидностей культуры, полу­чивших преимущественное развитие.

Контрольные вопросы

1. Классификация питательных сред.

2. Методы стерилизация лабораторной посуды и питательных сред.

3. Методы приготовления отдельных питательных сред (МПБ, МПА, МПЖ, СА, КА и др.) Разливка питательных сред.

4. Особенности культивирования микроорганизмов (поверхностное и глубинное, периодическое и непрерывное). Накопительные и чистые культуры.

Вопросы для самостоятельного изучения

1. Способы приготовления нативных и фиксированных препаратов микроорганизмов.

2. Изучить основные этапы развития науки микробиологии, вклад русских и зарубежных ученых в ее развитие. Заполнить таблицу № 1.

Таблица № 1. История развития микробиологии

ЗАНЯТИЕ № 2

Поиск по сайту: