Ход работы. Задание № 1.Получение чистой культуры микроорганизмов

Задание № 1. Получение чистой культуры микроорганизмов

Выделение чистых культур аэробов проводят, рассевая накопительную культуру на поверхность твердой питательной среды. Посев проводят методом истощающего штриха. После того, как колонии вырастут, поверяют чистоту выделенных колоний визуально и микроскопированием. Через 3-6 суток выбирают и описывают изолированную колонию микроорганизмов (используя рисунки приложения). Колонию описывают по следующей схеме:

1. Величина колонии: точечные (D – меньше 1 мм), мелкие (D – 1-2 мм), средние (D – 2-4 мм) и крупные (D – 4-6 мм и более).

2. Форма колонии – округлая, амебовидная, ризоидная.

3. Оптические свойства – прозрачная, матовая, флуоресцирующая, полупрозрачная (просвечивает), непрозрачная, блестящая.

4. Цвет – отмечают цвет колонии и выделение пигмента в среду.

5. Поверхность – гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая.

6. Профиль – плоский, выпуклый, кратерообразный, врастающий в агар и т.д.

7. Край колонии – ровный, волнистый, лопастной, ризоидный и др.

8. Структура колонии – однородная, мелко или крупнозернистая.

9. Консистенция – маслянистая, тестообразная, вязкая, пленчатая.

Задание № 2. Провести количественную оценку микроорганизмов нефелометрическим методом.

а) Нефелометрический метод. Плотность клеток S. cerevisiae в жидкой среде определяют нефелометрически (ФЭК), используя кювету с длиной оптического пути 0,5 см и зеленый светофильтр (А = X 540 нм). Для получения достоверных результатов плотность клеток должна быть в пределах 0,1-0,6. При концентрациях клеток выше 0,6 происходит вторичное рассеяние света, что приводит к получению заниженных результатов. Поэтому суспензии больших плотно­стей перед измерением светопропускания следует разводить водой в 2, 4, 6, 8 и 10 раз. Результаты измерений оптической плотности каждой суспензии (контролем служит вода) записывают в таблицу № 6.

б) Подсчет клеток в камере Горяева-Тома. Для перехода от показаний фотоэлектроколориметра (ФЭК) к количеству клеток микроорганизмов в среде подсчитывают их число, пользуясь счетной камерой Горяева-Тома и разведениями суспензии дрожжей, которые использовали для определения их плотности нефелометрическим методом. Клетки подсчитывают в больших квадратах сетки, пользуясь объективом 8*. Общее число подсчитанных клеток должно быть не менее 600. Количество клеток в 1 мл соответствующей суспензии рассчитывают по формуле М = 1000*a*n/h*S, где М – число клеток в 1 мл суспензии; а – среднее число клеток в большом квадрате сетки; h – глубина камеры (1/10 мм); S — площадь большого квадрата сетки (1/25 мм²); n – степень разведения суспензии; 1000 мм³ – 1 мл. Полученные результаты, млн. клеток в 1 мл записывают в табл. № 6.

Таблица № 6. Количество клеток дрожжей в суспензиях, установленное с помощью камеры Горяева, и соответствующие показания ФЭК

Построить калибровочную кривую на основании данных табл. № 6, откладывая на оси абсцисс количество клеток дрожжей, а на оси ординат оптическую плотность соот­ветствующей суспензии. Калибровочную кривую строят для быстрого определения ко­личества клеток определенного вида микроорганизмов по показаниям ФЭК.

Контрольные вопросы и задания

1. Накопительные культуры и принцип элективности. Чистые культуры, методы получения и значение.

2. Размножение микроорганизмов.

3. Клеточные циклы бактерий. Рост отдельных микроорганизмов и популяций. Сбалансированный и несбалансированный рост.

4. Параметры роста культур: время генерации, удельная скорость роста, выход биомассы, экономический коэффициент.

5. Кривые роста, особенности отдельных фаз. Рост микроорганизмов при непрерывном культивировании. Синхронные культуры.

Поиск по сайту: