Лабораторная диагностика грибковых заболеваний

Практическое занятие №4.

Микозы - заболевания кожи, вызываемые патогенными гри­бами — дерматофитами (бесхлоро­филловые споровые растения, размером от нескольких до сотен мик­рометров, клетка гриба имеет ядро, цитоплазму и оболочку, вегетативное тело паразитарных грибов состоит из ветвящихся нитей мицелия различной длины и толщины с разнообразными концевыми ветвлениями, мицелий септирован поперечными перегородками на множество клеток; нити раз­виваются из спор; споры грибов служат для размножения; дерматофиты размножаются бесполым путем - делением, почкованием и спорообразованием).

Грибковые заболевания кожи делят на 4 группы.

1. Кератомикозы. Локализуются в роговом слое эпидермиса, воспалительные явления в других слоях кожи отсутствуют (рубьевидный (разноцветный) лишай, пьедра).

2. Дерматомикозы. Проявляются выраженной воспалительной реакцией, поражают эпидермис, дерму, волосы, ногти (эпидермофития, трихофития, фавус, микроспо­рия).

3. Кандидамикозы кожи и слизистых оболочек. Поражаются слизистые оболочки, кожа и ее придатки, а так же внутренние органы, наиболее часто вызываются дрожжеподобными грибами рода Candida (кандидозы).

4. Глубокие микозы. Вызываются тяжелые поражения всех слоев кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, мышц, костей и Н.С (пенициллиоз, мукороз, аспергиллез).

Отдельно выделяют псевдомикозы (эритразму, актиномикоз), которые хотя и не явля­ются грибковыми заболеваниями, но по сходству клинических проявлений с истинными микозами нуждаются во взаимной дифференци­альной диагностике. Существует много различных кожных заболеваний, напоминаю­щих по своей клинической картине грибковые поражения кожи, поэтому лабораторные исследования играют большую, нередко реша­ющую роль в диагностике дерматомикозов. Каждый случай грибково­го заболевания требует лабораторного подтверждения.

Этапы лабораторной диагностики микозов:

1)обнаружение возбудителя в патологическом материале (микро­скопическое исследование нативных или окрашенных препаратов);

2)выделение возбудителя в культуре (посевы на питательные сре­ды);

3)идентификация возбудителя;

4) изучение ответной реакции макроорганизма по серологичес­ким, иммунологическим реакциям, проведение кожных аллергичес­ких проб и др. Иногда проводится гистологическое исследование и экспериментальное заражение животных.

Техника взятия материала. Правильная техника взятия материала для микроскопического иссле­дования и посева имеет решающее значение для получения надежных результатов. Для исследования по возможности следует брать заведо­мо патологический материал. Кожу и ногти предварительно обраба­тывают 70% этиловым спиртом. Производят соскоб чешуек или обрывков рогового слоя, преимущественно с пери­ферической зоны очага, со свежих высыпаний. Исследованию подле­жат покрышки пузырьков и пустул. Материал можно брать скальпе­лем, эпиляционным пинцетом, липкой лентой, прикрепив ее затем на предметное стекло.

При взятии материала с волосистой части головы больного усаживают так, чтобы волосы были хорошо ос­вещены. Внимательно осматривают всю поверхность го­ловы, а на участке облысения подрывают чешуйки, кото­рые захватывают вместе с пораженным волосом (волосы обесцве­чены, тусклые, в виде черных точек или окутаны белым или серым чехлом, состоящим из спор гриба). При этом пораженный волос не следует тянуть пинцетом, так как он может обломиться и часть его, находящаяся в ко­же, не будет подвергнута исследованию. При наличии не­скольких мест поражения материал берут с каждого из них.

При поражении грибом гладкой кожи вместе с чешуйками берут и пушковые во­лосы; чешуйки и покрышки пузырьков соскабливают шпателем или скальпелем с периферических участков очагов поражения. Чтобы лучше рассмотреть и отоб­рать материал, можно пользоваться лупой. Для микроспории лучше использо­вать лампу Вуда, в лучах которой волосы, пораженные грибами светятся.

При исследовании ногтей с помощью острой бритвы или скальпеля производят соскабли­вание чешуек с поверхностных очагов поражения и сре­зают пластинки из более глубоких слоев пораженного ногтя.

Волосы, чешуйки (кожные и ногтевые) поме­щают в двойные пакеты из черной бумаги, на которых надписывают место и дату взятия материала, диагноз, фамилию, имя и отчество обследуемого. Материал реко­мендуется брать в достаточном количестве, чтобы можно было провести повторное исследование. Гной собирают стерильной пастеровской пипеткой, бактериальной пет­лей, стерильным шприцем в пробирки или колбы с при­тертой пробкой.

Техника приготовления препаратов. Полученный из волос и чешуек материал подвергают специальной обработке с целью растворения эпидермальных клеток, слизи, гноя, а также для просветления пигмента волос, что делает препарат более наглядным для изучения. При исследовании волос и чешуек с гладкой кожи их помещают на предметное стекло, измельчают скальпелем, наносят 1—2 капли 30 % едкого калия и подогревают над пла­менем горелки (не доводя до кипения) до появления кристаллов щелочи на периферии капли. После прогревания препарат покрыва­ют покровным стеклом, оставляют на 5—10 мин и микроскопируют. Гной, мокроту, осадок мочи вносят в капельку 10 % раствора едкого ка­лия, накрывают покровным стеклом и исследуют без по­догревания. В последнее время рекомендуют использо­вать 10 % раствор сульфита натрия. В этом случае к исследуемому материалу прибавляют 2 капли реактива, а через 1—2 мин еще 1 каплю и накрывают покровным стеклом.

Если исследуют чешуйки со стоп, подошвы, ногтей, применяют способ медленной обработки, так как этот материал труднее поддает­ся воздействию щелочи. Материал помещают в пробирку, заливают 10% щелочью, выдерживают в термостате при 37° в течение 10 - 12 ч и рассматривают на следующий день. Если требуется полу­чить результат исследования быстро, используют метод Черногубова (метод обогащения). Берут чешуйки кожи, срезы ногтей и другой материал в пробирку, прибавляют 4-5 мл 30% раствора едкого калия, кипятят на водяной бане до полного растворения роговых чешуек. Затем содержимое пробирки центрифугируют 15 мин, надосадочную жидкость сливают. Исследуют осадок в начале под малым, затем под большим увеличением микроскопа с опущенным конденсором и несколько суженной диафрагмой. Щелочь как просветляющий раствор имеет ряд недостатков (при перегреве препарата выпадают кристаллы, а волосы растворяются, в связи с чем ее можно заменить раствором диметилсульфоксида, 10% раствором сульфида натрия).

Микоскопическая картина однообразная. Поэтому род и вид гриба в большинстве случаев не может быть определен по его микроскопической картине в кожной чешуйке или в соскобе с ногтя.

В заключении указыва­ют: обнаружены нити мицелия и споры. Указывают количество гриб­ковых элементов (септированные или нет), величину и форму спор (круглые, грушевидные, палочковидные, овальные), их группировку. В отличие от капель жира, споры имеют относительно одинаковые размеры. Нити мицелия имеют равномерную толщину, закругленные концы, зеленоватый блеск и перегородки (хотя бы и редкие). Расти­тельные волокна обладают неровными, бахромчатыми концами. При исследовании кожи ладоней и стоп нередко видны зерна кератогиалина, которые могут быть приняты за споры грибов. Однако эти зерна обычно мельче грибковых элементов и располагаются внутри клеток кожи, нередко преломляются при вращении микровинта мик­роскопа. Кристаллы щелочи, выпадающие в виде нитей, отличаются от мицелия грибов тем, что они имеют стекловидную прозрачность и весьма мономорфны. При добавлении под покровное стекло капли воды и подогревании кристаллы растворяются. Пузырьки воздуха в отличие от спор имеют толстые темные контуры, и по размеру даже самые маленькие пузырьки воздуха всегда больше клеток гриба.

Определение рода и вида гриба-возбудителя имеет большое значе­ние, для выращивания культур грибов проводят посевы на различные питательные среды, на которых получают рост колоний. Наиболее широкое применение для выделения культур патогенных грибов име­ет среда Сабуро. Определение культуры гриба производят как на основании ее внешней морфологии, так и ее микроскопического строения.

Пользуясь ниже изложенной информацией, заполните следующую таблицу: Морфологические особенности возбудителей микозов

Поиск по сайту: