Тема: Лейкоциты. Свойства и функциональные особенности различных форм лейкоцитов. Методы исследования белой крови

Лейкоциты обеспечивают иммунитет - защиту организма от любых чужеродных агентов. Увеличение количества лейкоцитов - лейкоцитоз, уменьшение - лейкопения. Процентное соотношение различных форм лейкоцитов называют лейкоцитарной формулой. Анализ лейкоцитарной формулы имеет большое диагностическое и прогностическое значение при оценке функциональной особенности кроветворных органов. Она имеет видовые отличия и характерно изменяется при заболеваниях, поэтому ее изучению придается большое значение в клинике.

При микроскопе окрашенного мазка крови можно обнаружить, что лейкоциты имеют неодинаковые размеры, различную форму ядра, неодинаковую протоплазму. Клетки, содержащие в протоплазме зернистость, относятся к группе гранулоцитов; не содержащие зернистости - к группе агранулоцитов.

Зернистые лейкоциты развиваются (как и эритроциты) в красном костном мозге эпифизов трубчатых костей из особых клеток - гематоцитобластов. Более “молодые” зернистые лейкоциты имеют компактное, несколько вытянутое ядро и называются палочкоядерными; более “зрелых” клеток - сегментированных - ядро расщеплено на несколько соединенных между собой частей.

Зерна в протоплазме красятся основными или кислыми красителями. К зернистым лейкоцитам относятся нейтрофилы, эозинофилы и базофилы.

Незернистые лейкоциты развиваются в ретикулоэдотелиальной ткани лимфатических узлов и селезенки. Сюда относятся лимфоциты - небольшие клетки, почти весь объем, которых, занят плотным синим ядром, окаймленным голубым ободком протоплазмы: моноциты - крупные клетки с бобовидным рыхлым ядром голубовато - серой вуалеобразной протоплазмой.

Существенным показателем физиологического состояния (в частности, реактивности) организма животного служит кроветворная система, чутко реагирующая на воздействие самых разнообразных факторов.

В крови сельскохозяйственных животных и птиц в наибольшем количестве содержатся лимфоциты и нейтрофилы. Изменение лейкоцитарной формулы может быть в сторону, как увеличения, так и в сторону уменьшения тех или иных форм лейкоцитов.

Таблица 1 Лейкограмма животных ^*1

Примечание: 1) Практикум по физиологии сельскохозяйственных животных: Учеб. пособие / П.Н. Котуранов, В.К. Гусаков, Ю.И. Никитин и др.; Под ред. П.Н. Котуранова. -– Мн.: Ураджай, 2000.

2) Б – базофилы, Э – эозинофилы, Ю - юные нейтрофилы, П – палочкоядерные нейтрофилы, С – сегментоядерные нейтрофилы, Л – лимфоциты, М- моноциты.

Лейкограмма может быть двух типов: нейтрофильная и лимфоцитарная. Нейтрофильная формула, или нейтрофильный характер крови, характерна для лошадей, собак и многих других видов животных с однокамерным желудком: содержание нейтрофилов от 50 до 70%. У жвачных животных в крови преобладают лимфоциты (от 50 до 70%), и такой тип лейкограммы называется лимфоцитарным. У свиней примерно равное количество нейтрофилов и лимфоцитов, их лейкограмма имеет переходный тип.

Цель занятия:

1. Сформировать понятие системы лейкона, ее роли в поддержании гомеостаза.

2. Выяснить изменения в системе лейкона при различных физиологических состояниях.

3. Познакомиться с методами лабораторного исследования лейкоцитов.

Домашнее задание:

1. Написать лейкоцитарную формулу.

2. Перечислить функции лейкоцитов.

3. Нарисовать схему нейрогуморальной регуляции лейкопоэза.

Вопросы для подготовки к занятию:

1. Лейкоциты и их физиологическое значение?

2. Морфологическая и функциональная характеристика различных форм лейкоцитов.

3. Понятие о лейкоцитозе, лейкопении, индекс сдвига.

4. Что такое лейкоцитарная формула и с какой целью она выводится?

Работа № 1. Анализ лейкоцитарной формулы.

Оборудование: микроскоп, иммерсионное масло.

Объект исследования: мазки крови окрашенные по Гимза –

Романовскому.

Ход работы.

На окрашенный мазок нанести каплю иммерсионнго масла и, закрепив препарат в препаратоводителе, просматривать его при окуляре 7(10) и объективе 90.

В мазке найти все основные элементы, сравнив их форму, размеры, структуру у разных видов животных.

Произвести подсчет (100) или (200) лейкоцитов, передвигая препарат лестницеобразно, смещая препарат справа налево. Подсчитанную сумму отдельных лейкоцитов вычислить их процентное содержание, вывести лейкоцитарную формулу.

Результат: заполнить таблицу «Лейкоцитарная формула»

Вывод: В заключение укажите отклонения от нормы в приведенных параметрах. Если отклонений нет, то отметьте, что «показатели крови в норме».

Работа № 2. Подсчет количества лейкоцитов.

Цель работы: Ознакомиться с методикой подсчета лейкоцитов.

Оборудование: Микроскоп, смеситель для лейкоцитов, жидкость Тюрка, спиртовые тампоны, глазные пипетки, камера Горяева, покровные стекла.

Объект исследования: кровь.

Ход работы.

Для подсчета количества лейкоцитов кровь следует развести жидкостью, которая устранила бы эритроциты. Разбавляющими жидкостями для подсчета являются гипотонические растворы, гемолизирующие эритроциты. Дистиллированная вода гемолизирует эритроциты. Добавляемая уксусная кислота просветляет протоплазму лейкоцитов, вследствие чего ядра хорошо видны. Добавление краски (генцианвиолета), окрашивающей ядра способствуют различию их формы.

Состав жидкости Тюрка для разбавления:

Ледяная уксусная кислота - 3см³, 1% водный раствор генцианвиолета - 3 см³, дистиллированная вода - 300см³.

Разбавление крови с помощью смесителя

Для разбавления лейкоцитов применяется смеситель, разбавляющий не в 200 раз, а только в 20, поэтому в смесителях для лейкоцитов имеются метки: на капилляре цифры 0.5 и 1, выше расширения цифра 11 (рис. 12).

. Набрать в смеситель кровь до метки 0.5 и жидкость Тюрка до метки 11. Перевести смеситель в горизонтальное положение, снять резиновую трубочку, задать оба конца пальцами и встряхивать 1.5 минуты.

Разбавление крови пробирочным методом

Разводят исследуемую кровь в 20 раз, для этого в сухую пробирку наливают 0,4 мл уксусной кислоты. Набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей, следя за тем, чтобы из пипетки кровь не вылилась.

Рис. 12.Смесители.

В - смеситель для эритроцитов, Г - смеситель для лейкоцитов.

Выдувают кровь из пипетки на дно пробирки, тщательно перемешивают (повторно набирая и выдувая смесь крови с уксусной кислотой). Маркируют пробирку и оставляют до мо­мента счета (допускается счет лейкоцитов не более чем через 2…4 ч после взятия крови).

Подсчет лейкоцитов

Заправить счетную камеру разбавленной жидкостью, как в предыдущем случае, при подсчете эритроцитов. Сосчитать лейкоциты на площади 100 больших квадратов, сумму умножить на 50, что будет соответствовать количеству лейкоцитов в 1 мм³ крови.

По международной системе измерения общую сумму лейкоцитов умножить на 10⁹, что будет соответствовать количеству лейкоцитов в одном литре крови. Пример: в 100 больших квадратах подсчитали 140 лейкоцитов, в 1 мм³ крови их будет 7000 (140 * 50), а в одном литре крови 7 * 10⁹ (СИ).

У здоровых лошадей, крупного и мелкого рогатого скота в крови содержится 6…10 Г/л лейкоцитов (Г = 10⁹; читают: гига на литр); у свиней лейкоцитов больше – 8…16, а у птиц – 20…40 Г/л.

Результат: Результаты анализа крови обычно записываются на бланках, в которых указываются все исследованные параметры, см. табл. 2.

Таблица 2

Пример результата анализа крови

Вывод: Заключение по анализу крови.

Занятие № 6. Основы переливания крови.

Работа № 1. Определение группы крови по системе АВ0.

Под группами крови АВ0 понимают различные сочетания антигенов

(агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к

ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Существует два групповых агглютиногена (А и В) и два агглютинина (ά и β).

Разные сочетания этих свойств образуют четыре группы крови: 0 (I), А (II),

В (III) и АВ (IV).

Для установления группы крови используются стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов.

Метод определения группы крови по системе АВ0 основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим агглютинины – антитела против антигенов А и В (агглютиногенов). В качестве таких растворов служат моноклональные анти-А и анти-Вантитела, поликлональные иммунные сыворотки или сыворотки крови лиц со II и III группами крови.

Цель работы: ознакомиться с методиками определения групп крови.

Задача: Определить группу крови по системе АВО.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, эмалированные пластинки с лунками, стеклянные палочки, стандартные сыворотки для определения групп крови и резус-фактора.

Ход работы:

Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. На планшет в разные лунки индивидуальными пипетками нанесите растворы анти - А и анти - В по одной большой капле (0,1 мл). Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01–0,03мл). Стеклянной палочной (разными концами в каждой лунке) смешайте кровь с реагентами.

За ходом реакции наблюдайте визуально при легком покачивании пластины в течение 3 минут. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты наблюдаются в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Таблица 3

Интерпретация результатов реакции агглютинации

Примечание. «+» - наличие агглютинации, «–» – отсутствие агглютинации.

Рекомендации по оформлению протокола работы

Интерпретируйте результаты реакции агглютинации в соответствии с табл. 3.

Работа № 2. Определение резус-фактора

Цель: ознакомиться с методиками определения резус-фактора.

Задача: определить резус-фактор.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, эмалированные пластинки с лунками, стеклянные палочки, стандартные сыворотки для определения резус-фактора.

Объект исследования: кровь.

Определение резус - принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена), названного резус-фактором.

Выделяют три разновидности резус - антигена: D, С, Е. Наибольшей активностью обладает антиген D, поэтому именно его определение имеет важное значение. Группы крови, в которых содержится антиген Rh(D), условно принято считать резус-положительными (Rh+), а группы крови, не содержащие антигена Rh(D) – резус-отрицательными (Rh-).

Метод определения резус - принадлежности – резус-фактора (Rh-фактора) крови человека – основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим антитела против резус - антигена (D).

В качестве таких растворов служат моноклональные анти - D антитела или поликлональная иммунная антирезусная сыворотка.

Ход работы

Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. В лунку эмалированного планшета внесите большую каплю (0,1мл) реагента – раствора с антирезусными антителами. Рядом поместите маленькую каплю исследуемой крови (0,01–0,03мл). Стеклянной палочкой кровь смешайте с реагентом.

В течение 3 мин наблюдайте за ходом реакции визуально при легком покачивании пластины. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным.

Поиск по сайту: