Материал и методы исследования

ОТЧЕТ

О научно-исследовательской работе

«Исследованиеэмбриотоксического действия

метилового эфира 2-бензимидазолилкарбаминовой кислоты (БМК, бавестин, карбендазим) и его комплексного соединения с сульфатом меди, БМК₂·CuSO₄»

Руководитель темы С.А. Башкатов

Ответственный исполнитель Л.А. Шарафутдинова

Уфа-2015

Введение

Изучение репродуктивной токсичности – влияния лекарственныхсредств на генеративную функцию, развитие плода и потомства – является обязательной частью доклинического изучения их безопасности,поскольку по статистике до 80% женщин применяют какие-либо медикаменты во время беременности, и около 3% новорожденных имеют родовые дефекты или аномалии развития. Этиология более чем половиныврожденных дефектов у человека неизвестна. Определенную долю в этойчасти составляют лекарственные препараты. Лекарственное веществоможет обладать эмбриотоксическим действием, оказывая прямое токсическое действие на плод после проникновения через плацентарныйбарьер либо воздействуя на плаценту или материнский организм. Эмбриотоксичность может проявляться как в повышении уровня эмбриональной гибели (эмбриолетальное действие), так и в виде анатомических, гистологических, цитологических, биохимических, нейрофизиологических отклонений от нормы (тератогенное действие), проявляющихся доили после рождения. Эмбрио- и фетотоксичность могут проявляться визменении массы тела, краниокаудального размера плода, задержке оссификации скелета (общая задержка развития), увеличении смертности.Могут наблюдаться различные отклонения в развитии потомства. Выявление в эксперименте такого рода отдаленных эффектов лекарств имеетбольшое практическое значение в антенатальной охране здоровья детей.Изучение воздействия фармакологических веществ на отдельных стадиях репродукции позволяет не только избежать отрицательных моментов,связанных с длительным введением препаратов, но и приблизить экспериментальные условия к клиническим.В связи с этим изучение воздействия лекарственных средств на показатели репродуктивной функции животных представляется актуальной задачей.

Цель работы – выявление возможных эмбриотоксических свойств метилового эфира 2-бензимидазолилкарбаминовой кислоты (БМК, бавестин, карбендазим) и его комплексного соединения с сульфатом меди, БМК₂·CuSO.

Материал и методы исследования

Работа выполнена в лаборатории оценки безопасности современных материалов и технологийКафедры физиологии человека и зоологии биологического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный университет» и является разделом НИР согласно договорана создание (передачу) научно-технической продукции (№1013 от 5.12.2014). В исследованиях использованметиловый эфир 2-бензимидазолилкарбаминовой кислоты (БМК, бавестин, карбендазим) и его комплексное соединение с сульфатом меди (БМК₂·CuSO₄).

Исследование эмбриотоксических свойств БМК и БМК₂·CuSO₄проведено в соответствии с «Методическими указаниями по изучению репродуктивной токсичности фармакологических веществ» [1].

Изучение эмбриональной токсичности были проведены на 30 самках нелинейных белых крыс массой 170-210 г. Всех животных содержали в одинаковых условиях вивария на стандартном сбалансированном рационе.В течение двух эстральных циклов просматривали вагинальные мазки. Отмечали стадии проэструс, эструс, диэструс и метаэструс (рис. 1-4). Вечером подсаживали самцов из расчета 2 самца на 3 самки. Обнаружение в вагинальных мазках сперматозоидов считали первым днем беременности (рис. 5). Беременные самки крыс были разделены на 3 группы по 10 животных. Контрольная группа крыс – интактная. Исходя из того, что карбендазим в дозе 20-80 мг/кг проявляет выраженное эмбриотоксическое действие [2] животным Опытной группы 1 вводили перорально карбендазимв дозе 40-80 мг/кг, а Опытной группы 2 -БМК₂·CuSO₄ в аналогичной дозеежедневно с 1-го по 19-й день беременности.

На 20-й день беременности проводили эвтаназию животных с последующим патологоанатомическим исследованием организма крыс и плодов (рис. 6). Вскрывали брюшную полость (рис. 7-10), вырезали матку и в чашке Петри с физиологическим раствором, вскрыв рога, подсчитывали количество живых, мёртвых, резорбированных плодов, состояние плаценты и эндометрия, отмечая места имплантации (рис. 11). В яичниках подсчитывали количество жёлтых тел. Плоды подвергали наружному осмотру, взвешиванию, определяли краниокаудальный размер (длину тела) (рис. 12), пол плода. Устанавливали пред-ипостимплантационную смертность эмбрионов, которые являлись показателем эмбриолетального действия исследуемых веществ.

Для определения предимплантационной смертности находили разницу между количеством желтых тел (желтое тело — corp. luteum, развивающееся в яичнике после овуляции из клеток зернистого слоя — str. granulosum — и соединительнотканной оболочки фолликула — теки фолликула — thecafolliculi; является железой внутренней секреции, выделяет прогестерон) и количеством мест имплантаций и вычисляли, какую долю в процентах составила эта цифра от числа желтых тел. Для определения постимплантационной смертности вычисляли разность между количеством мест имплантаций и количеством живых плодов и, вычисляли, какую долю в процентах составила эта цифра от числа имплантаций. Для вычисления общей эмбриональной смертности находили разность между числом желтых тел беременности и количеством живых плодов и,определяли какую долю в процентах составила эта цифра от числа желтых тел беременности.