 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
Принцип РТГА
В реакции торможения гемагглютинации выделяют 2 фазы:
1. Специфическая. В эту фазу смешивают сыворотку с антигеном. Если в сыворотке содержатся антитела, гомологичные антигену, то образуется комплекс антиген + антитело, и вирус утрачивает гемагглютинирующие свойства;
2. Индикаторная. Роль индикатора выполняет 1% взвесь эритроцтов, при добавлении которой гемагглютинации не наблюдается (если антитела и антиген гомологичны) – положительная реакция (осадок в виде пуговки). При отрицательной реакции, если антиген и антитела гетерологичны, блокировки вируса не происходит, на дне образуется осадок в виде зонтика.
Компоненты реакции
1. Испытуемый вируссодержащий материал или стандартный вирус (диагностикум)
2. Иммунная специфическая сыворотка или испытуемая сыворотка
3. Взвесь эритроцитов
Методика постановки РТГА
РТГА для идентификации вируса
Реакцию ставят на плексиглазовых пластинках с лунками. В ряду лунок готовят ряд последовательных двукратных разведений иммунной специфической сыворотки к предполагаемому вирусу. Для этого разливают по 0,25мл физраствора, а затем в первую вносят 0,25мл сыворотки и переносят в последующие, из последней в дезраствор. Таким образом, получают разведения 1:2, 4, 8, 16 и так далее.
В каждую лунку добавляют по 0,25мл ВСМ в количестве 4 ГАЕ (см. РГА) и выдерживают 20 минут при комнатной температуре или в термостате.
Во все лунки добавляют по 0,5мл 1% взвеси эритроцитов. Выбор эритроцитов такой же, как для РГА,
В контрольных лунках (2х) смешивают сыворотку с эритроцитами и физраствор с эритроцитами (по 0,5 каждого компонента). Выдерживают 20 минут при комнатной температуре и учитывают реакцию.
Если реакция положительная – на дне луно образуется осадок в виде красной пуговки, в контрольных лунках также должны быть пуговки. По антителам сыворотки определяют вид вируса.
РТГА для прижизненной серологической диагностики.
Исследуют сыворотку со стандартным вирусом (4ГА)
| Сыворотка по 0,25мл | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | 1:1280 | 1:2560 | 1:5120 |
| Вирус (4АЕ) | Во все пробирки по 0,25 | |||||||||
| Через 30 минут | ||||||||||
| 1% взвесь эритроцитов | По 0,5 мл в каждую пробирку | |||||||||
| Учет результатов | ||||||||||
| ++ | ++ | +++ | +++ | +++ |
0 – отсутствие гемагглютинации
+ - наличие гемагглютинации
В данном случае титр антител = 1:160 (наибольшее разведение сыворотки, которое тормозит гемагглютинацию вируса).
Сыворотки перед исследованием инактивируют, т.е. освобождают от ингибиторов. От термолабильных ингибиторов освобождаются путем прогревания сывороток при температуре 56-58 градусов, от термостабильных – с помощью углекислого газа, или используют порошок холерного вибриона.
Поиск по сайту: