Общих липидов в сыворотке крови

Задание 1. Определить содержание ЛПНП и ЛПОНП в сыворотке крови турбидиметрическим методом по Бурштейну и Самай.

Принцип. Метод базируется на способности гепарина образовывать комплекс с ЛПНП и ЛПОНП сыворотки крови, который под действием кальция хлорида выпадает в осадок. Степень помутнения раствора пропорциональна содержанию этих липопротеинов в сыворотке крови.

Ход работы. В 5 мм кюветы ФЕК наливают по 2 мл раствора 0,025 моль/л кальция хлорида. Устанавливают «нуль» при длине волны 720 нм (красный светофильтр). В одну кювету приливают микропипеткой 0,2 мл сыворотки, несколько раз промывают пипетку. Отмечают начальное значение экстинкции Е₁, затем прибавляют микропипеткой 0,04 мл раствора гепарина, который содержит 1 000 единиц в 1 мл, несколько раз промывают пипетку. Перемешивают содержимое кюветы, через 4 мин (по секундомеру) снова измеряют экстинкцию Е₂. Содержание ЛПНП и ЛПОНП (Х) в г/л в сыворотке крови рассчитывают по формуле:

Х = (Е₂ – Е₁) × 11,65,

где 11,65 – эмпирический коэффициент пересчета содержания липопротеинов в г/л.

Клинико-диагностическое значение. При ультрацентрифугирова-нии крови выделяются липопротеины разной плотности: высокой (ЛПВП), низкой (ЛПНП), очень низкой (ЛПОНП) и др. Фракции липопротеинов отличаются количеством белка и содержанием в процентах отдельных липидных компонентов. Так, ЛПВП содержат большое количество белка (50-60%), имеют высокую относительную плотность (1,063-1,210), тогда как ЛПНП и ЛПОНП содержат меньше белка, значительное количество липидов - до 95% массы и имеют низкую относительную плотность (1,010-1,063). В норме содержание липопротеинов сыворотки крови составляет 3,6-6,5 г/л. Повышение уровня липопротеинов тесно связано с увеличением количества холестерола в крови; им богаты ЛПНП. Увеличение содержания ЛПНП и ЛПОНП наблюдают при атеросклерозе, сахарном диабете и других заболеваниях.

Задание 2. Определить содержание общих липидов в сыворотке крови.

Принцип. Метод базируется на способности продуктов распада ненасыщенных липидов образовывать с фосфатнованилиновым реактивом окрашенное соединение; интенсивность окраски пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.

Ход работы. В сухую опытную пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови и осторожно 2,9 мл концентрированной сульфатной кислоты, а в контрольную – 0,2 мл воды и 5,8 мл концентрированной сульфатной кислоты. Содержимое обеих пробирок тщательно перемешивают стеклянной палочкой и помещают на кипящую водяную баню на 10 мин (осторожно!). Затем обе пробирки быстро охлаждают под струей холодной воды до комнатной температуре. Из опытной пробирки отбирают 0,2 мл, а из контрольной – 0,4 мл охлажденной смеси в другие пробирки, в которые заранее наливают фосфатнованилиновый реактив: в опытную – 3 мл, в контрольную – 6 мл. После тщательного перемешивания стеклянной палочкой пробы ставят на 45 мин в темное место при комнатной температуре для развития окраски. Фотометрируют опытную пробу против контрольной на ФЕК при 500-560 нм (зеленый светофильтр) в 5 мм кювете. Содержание общих липидов (Х) в г/л в сыворотке крови рассчитывают по формуле: Х = (m × 10 000 × 3)/(0,2 × 1 000),

где m – масса общих липидов пробы, найденная по калибровочному графику (мг); 10 000 – коэффициент пересчета на 1 л сыворотки крови; 1 000 – коэффициент пересчета мг в г; 3 – общий объем начальной смеси (мл); 0,2 – объем смеси, взятой для проведения цветной реакции (мл).

Клинико-диагностическое значение. Содержание липидов крови (в частности триглицеридов, фосфолипидов, холестерола) в комплексе с белками (альбуминами) и в форме липопротеинов является важным диагностическим показателем. Нормальное содержание общих липидов в сыворотке крови составляет 4-8 г/л. Повышение содержания липидов в крови (гиперлипидемия) как физиологическое явление происходит через 1-4 ч после употребления богатой липидами пищи. Натощак уровень общих липидов снижается (гиполипидемия). Увеличение концентрации липидов в крови наблюдается при диабете (до 10-20 г/л), циррозе печени, атеросклерозе, ожирении, ишемической болезни сердца, липоидном нефрозе (заболевание почек), остром гепатите, панкреатите у лиц, которые злоупотребляют алкоголем.

ЛИТЕРАТУРА

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 190-194, 209-216, 224-230.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 237-241, 259-266, 274-281.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник.–Тернопіль:Укрмедкнига, 2002. – С. 363-366, 378-384.

4. Вороніна Л.М. та ін. Біологічна хімія. – Харків: Основа, 2000. – С. 301-306, 311-315.

5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 370-372, 392-398.

6. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 386-399, 432-439.

7. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998. – С. 281-289, 296-297, 299-303.

8. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Кобилянська Л.І./За ред. О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С. 119-145.

ЗАНЯТИЕ 9

Тема: Обмен высших жирных кислот и кетоновых тел. Обмен глицерола. Качественные реакции на кетоновые тела.

Актуальность. Высшие жирные кислоты выполняют, прежде всего, энергетическую роль. При интенсивном окислении жирных кислот в печени образуется значительное количество кетоновых тел (ацетоацетата и β-гидроксибутирата), которые поступают в кровь и ткани, где полностью окисляются в цикле Кребса. При патологических состояниях (тяжелых формах сахарного диабета, голодании) имеет место интенсивное образование и накопление кетоновых тел. Преобразование глицерола в клетках организма выполняет энергетическую роль, кроме того, глицерол может превращаться в углеводы.

Цель. Выучить теоретические положения обмена высших жирных кислот (синтеза и β-окисления) и пути его регуляции. Ознакомиться с кетогенезом и кетолизом, нарушениями обмена кетоновых тел. Усвоить основные метаболические пути преобразования глицерола. Ознакомиться с качественными реакциями на кетоновые тела в моче и их клинико-диагностическим значением.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ

1. b-Окисление насыщенных и ненасыщенных высших жирных кислот. Локализация и механизм процесса, его связь с циклом Кребса и тканевым дыханием. Роль карнитина в транспорте жирных кислот из цитоплазмы в митохондрии.

2. Активация жирных кислот. Показать на примере стеариновой кислоты и определить энергетическое значение ее полного окисления.

3. Энергетическая ценность β-окисления высших жирных кислот в клетках.

4. Процесс β-окисления масляной кислоты. Витамины, которые принимают участие в образовании коферментов этого процесса.

5. Процесс β-окисления капроновой кислоты, энергетическое значение ее полного окисления.

6. Биосинтез высших жирных кислот. Особенности состава и функции ацетил-КоА-карбоксилазы, пальмитатсинтазного комплекса. Регуляция процесса.

7. Биосинтез мононенасыщенных высших жирных кислот в организме человека.

8. Кетоновые тела. Реакции биосинтеза и утилизации кетоновых тел: локализация в организме, биологическое значение. Кетонемия и кетонурия при сахарном диабете, голодании и других заболеваниях.

9. Преобразование глицерола: окисление до СО₂ и Н₂О; превращение в углеводы. Реакции процессов. Энергетическая ценность.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1. Укажите конечный продукт β-окисления жирных кислот с непарным числом углеродных атомов.

2. Укажите представителя кетоновых тел в организме.

3. Назовите белки крови, которые транспортируют жирные кислоты.

4. Назовите продукт, который образуется при конденсации двух молекул ацетил-КоА в процессе биосинтеза кетоновых тел.

5. Укажите место синтеза кетоновых тел в организме.

6. Назовите витаминоподобное вещество, которое принимает участие в транспорте жирных кислот из цитоплазмы в митохондрии.

7. Укажите, на сколько атомов углерода укорачивается углеродная цепь высших жирных кислот за один цикл β-окисления.

8. В эндокринном отделении с диагнозом «сахарный диабет» находится женщина, 40 лет, с жалобами на жажду, повышенный аппетит. Какие патологические компоненты выявлены при лабораторном исследовании мочи пациентки?

9. Для сердечной мышцы характерным является аэробный характер окисления субстратов. Назовите основной из них.

10. Кетоновые тела в печени синтезируются из:

11. Гиперкетонемия наблюдается во всех ниже перечисленных случаях, кроме:

12. В каком из перечисленных метаболических путей происходит окисление ацетоуксусной кислоты?

А. В гликолизе.

В. В окислительном декарбоксилировании кетокислот.

С. В цикле трикарбоновых кислот.

D. В пентозофосфатном цикле. Е. В дыхательной цепи.

13. Следствиями гиперкетонемии являются следующие состояния:

14. Для повышения результатов спортсмену рекомендовано принимать препарат, который содержит карнитин. Какой процесс наиболее активируется карнитином?

А. Синтез кетоновых тел.

В. Тканевое дыхание.

С. Синтез липидов.

D. Транспорт жирных кислот в митохондрии.

Е. Синтез стероидных гормонов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Поиск по сайту: