Ферментативно по набору реактивов

Задание. Определить концентрацию холестерола в сыворотке крови.

Принцип. Вследствие гидролиза эфиров холестерола холестеролэсте-разой образуется свободный холестерол. Он, как и тот холестерол, что присутствует в крови, окисляется кислородом воздуха при участии холестеролоксидазы с образованием эквимолярных количеств гидроген пероксида. При участии пероксидазы гидроген пероксид окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного соединения, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации холестерола в крови. Её определяют фотометрически при длине волны 540 нм.

Ход работы. В штатив поместить 3 химические пробирки, обозначить – проба, калибровочная, холостая. Отмерить по 0,01 мл сыворотки крови в пробу; 0,01 мл калибровочного раствора - в калибровочную; 0,01 мл дистиллированной воды - в холостую. Отмерить 1 мл раствора реагента и прибавить соответственно в пробу, калибровочную и холостую. Содержимое пробирок перемешать и выдержать на протяжении 10 мин при температуре 37°С или 20 мин при комнатной температуре. Измерить экстинкцию пробы и калибровочной против холостой при длине волны 540 нм. Рассчитать концентрацию холестерола (Х) в ммоль/л в сыворотке крови по формуле: Х = Еп/(Ек × 5,2), где Еп - экстинкция пробы; Ек - экстинкция калибровочного раствора; 5,2 - содержание холестерола в калибровочном растворе (ммоль/л).

В случае концентрации холестерола больше 19,4 ммоль/л пробу необходимо разбавить изотоническим раствором натрия хлорида и полученный результат умножить на коэффициент разведения.

Клинико-диагностическое значение. Экзогенный холестерол (0,3-0,5 г в сутки) поступает с пищей, а эндогенный (0,8-2 г в сутки) - синтезируется в организме. Особенно много холестерола синтезируется в печени, кишечнике и коже, большое его количество содержится в нервной ткани (20-30 г/кг). Концентрацию холестерола определяют в комплексе с другими тестами для типирования гиперлипопротеинемии. В сыворотке крови здоровых людей она составляет в норме 3,0-5,7 ммоль/л. Длительное повышение концентрации холестерола в крови способствует развитию атеросклероза, в патогенезе которого ведущая роль принадлежит липопротеинам. Установлено, что атеросклероз и связанные с ним заболевания возникают при значительном повышении в плазме крови фракций ЛПНП, а во многих случаях и фракций ЛПОНП. Показано, что хиломикроны не могут проникать вглубь сосудистой стенки из-за своих больших размеров, а ЛПВП, ЛПНП и частично ЛПОНП способны это делать, однако ЛПВП наименьшие среди липопротеинов, и легче удаляются из стенок сосудов через их лимфатическую систему. Кроме того, ЛПВП, в которых наиболее высокое содержание белков и фосфолипидов, могут метаболизироваться в сосудистой стенке быстрее и выводиться из неё легче, чем богатые холестеролом и триглицеридами ЛПНП и ЛПОНП. Именно последние, атерогенные липопротеины, способны проникать в сосудистую стенку из плазмы крови и служить в дальнейшем первичным субстратом, что вызывает атеросклеротические поражения артерий. Гиперхолестери-немию наблюдают у больных гипертонией, ишемической болезнью сердца, при сахарном диабете, ожирении, механической желтухе, нефрите, нефрозе, сифилисе, гипотиреозе. Снижение концентрации холестерола (гипохолестеринемия) наблюдается при туберкулёзе, сыпном тифе, паренхиматозной желтухе, гипертиреозе, анемии, раковой кахексии, лихорадочных состояниях, некоторых нарушениях ЦНС, в случае голодания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 217-224, 230-233.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 267-274, 281-285.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 384-393.

4. Вороніна Л.М. та ін. Біологічна хімія. – Харків: Основа, 2000. – С. 313-314, 316-320.

5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 389-391, 398-408.

6. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 417-457.

7. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998. – С. 289-299, 368-384.

8. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Кобилянська Л.І. та ін. / За ред. О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С. 119-145.

ЗАНЯТИЕ 11

Поиск по сайту: