Качественные реакции на кетоновые тела в моче

Задание. Провести качественные реакции на кетоновые тела в моче.

А) Проба Легаля на ацетон и ацетоуксусную кислоту (АУК).

Принцип. Ацетон и АУК образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание в щелочной среде. После подкисления ледяной уксусной кислотой образуется соединение вишневого цвета.

Ход работы. На стекло наносят 1 каплю мочи, 1 каплю 10% раствора натрия гидроксида и 1 каплю свежеприготовленного 10% раствора нитропруссида натрия, появляется оранжево-красное окрашивание. Прибавляют 3 капли ледяной уксусной кислоты, появляется вишнево-красное окрашивание.

Б) Реакция Герхарда на АУК.

Принцип. Метод базируется на взаимодействии Fe³⁺ с енольной формой АУК с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Ход работы. К 5 каплям мочи прибавляют каплями 5% раствор феррум (III) хлорида; при этом выпадает осадок фосфатов в форме феррум (III) фосфата. При наличии АУК от дальнейшего добавления феррум (III) хлорида появляется вишнево-красное окрашивание. При стоянии окраска бледнеет вследствие спонтанного декарбоксилирования АУК. Реакция неспецифичная. Креатин мочи с нитропруссидом натрия дает аналогичное окрашивание, но в этом случае при добавлении концентрированной уксусной кислоты жидкость не окрашивается в вишневый цвет.

В. Экспресс-тест на ацетон и АУК.

Принцип. Полуколичественное определение кетоновых веществ в моче и сыворотке крови проводят с помощью диагностических полосок «Кетофан». Кетофан содержит щелочной буфер в смеси с нитропрусси-дом натрия, что дает с ацетоном и АУК фиолетовое окрашивание, интенсивность которого прямопропорциональна концентрации кетоновых тел в исследуемой жидкости.

Ход работы. Полоску погружают на 1-2 с в исследуемую жидкость и через 1 мин сравнивают окрашивание зоны индикации с цветной шкалой сравнения, которая напечатана на этикетке. Отдельные оттенки шкалы сравнения от едва фиолетового до темно-фиолетового соответствуют приблизительно от 1,2 до 1,5 г/л и выше АУК.

Клинико-диагностическое значение. Содержание кетоновых тел в крови здорового человека составляет 0,85-1,70 ммоль/л. В нормальной моче их количество незначительное (не больше 0,01 г/сут) и не выявляются качественными реакциями; эти реакции являются положительными лишь при выведении большого количества кетоновых тел при сахарном диабете, голодании, исключении углеводов из пищи. Кетонурия может наблюдаться при заболеваниях, связанных с усиленной затратой углеводов (тиреотоксикоз), кровоизлияниях, черепно-мозговых травмах, инфекционных заболеваниях (скарлатина, грипп, туберкулёз, менингит). В раннем детском возрасте продолжительные заболевания пищеварительного тракта (дизентерия, токсикозы) могут сопровождаться кетонемией и кетонурией в результате голодания и истощения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 194-209.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 241-259.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 366-377.

4. Вороніна Л.М. та ін. Біологічна хімія. – Харків: Основа, 2000. – С. 306-313.

5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 373-389.

6. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 399-417.

7. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998. – С. 271-279.

8. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Кобилянська Л.І. /За ред.О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С. 119-145.

ЗАНЯТИЕ 10

Тема: Обмен холестерола. Регуляция и нарушения обмена липидов. Определение содержания холестерола в сыворотке крови.

Актуальность. Холестерол составляет основную массу всех стероидов организма, он является предшественником в синтезе других стероидов – желчных кислот, гормонов, витамина Д₃, а также структурным компонентом клеточных мембран. Фонд холестерола создаёт холестерол пищи и его синтез в самом организме. Такие патологические состояния, как атеросклероз, желчнокаменная болезнь, гиперлипопротеинемии сопровождаются нарушением обмена холестерола.

Регуляция липидного обмена осуществляется нейрогуморальным путем. Кора головного мозга влияет на обмен липидов через симпатическую и парасимпатическую нервную систему, эндокринные железы. Знание особенностей метаболизма липидов в условиях нормы и патологии имеет большое практическое значение для будущих врачей, в частности, для правильной диагностики и рационального выбора лекарственных препаратов с целью коррекции разнообразных нарушений обмена липидов. Наиболее распространенными среди населения развитых стран мира являются болезни, связанные с нарушением липидного обмена (атеросклероз, ожирение, инфаркт миокарда), что с каждым годом требует уделять большого внимания в их лабораторной диагностике. Эта проблема становится все более актуальной, особенно с учётом того, что без исследования показателей липидного обмена невозможно иметь объективное представление и о функциональной способности целого ряда жизненно важных органов (например, печени и почек) при разнообразных болезнях. Увеличение количества липидов в крови является симптомом некоторых заболеваний, при которых вторично нарушается обмен липидов (сахарный диабет, гипотериоз, панкреатит, алкоголизм и др.). Основным биологическим материалом для проведения биохимической диагностики липоидоза (нарушения постоянства обмена жиров и липоидов – жи-рообразных веществ) является кровь больного, главными липидными компонентами которой выступают свободный холестерол и его эфиры, общие липиды, фосфолипиды, липопротеины.

Цель. Выучить особенности специфики обмена холестерола в ус-ловиях нормы и патологии; ознакомиться с регуляцией и нарушениями липидного обмена. Уметь применять знания теоретического материала с результатами лабораторного практикума и возможностью использования тестов липидного обмена в качестве продиагностических показателей. Оз-накомиться с методом количественного определения холестерола в сыворотке крови и его клинико-диагностическим значением.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ

1. Биосинтез холестерола: локализация, схема реакций, регуляция процесса.

2. Пути биотрансформации холестерола, локализация в организме: этерификация, образование желчных кислот, стероидных гормонов, активных форм витамина Д₃.

3. Биохимические механизмы развития атеросклероза. Коэффициент атерогенности. Атерогенные и антиатерогенные липопротеины.

4. Регуляция обмена липидов.

5. Патологии липидного обмена: стеаторея, ожирение, атеросклероз, гиперлипопротеинемии.

6. Нарушение обмена липидов при ожирении, сахарном диабете.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1. Какой процесс изменяется при большом поступлении холестерола с пищей?

А. Ускоряется синтез эндогенного холестерола.

В. Активируется катаболизм холестерола до СО₂ и Н₂О.

С. Снижается синтез холестерола в печени.

D. Повышается активность оксиметилглутарил-КоА-редуктазы.

Е. Снижается активность оксиметилглутарил-КоА-синтетазы.

2. Основным конечным продуктом обмена холестерола в печени является:

3. Назовите регуляторный фермент синтеза холестерола.

А. Ацетил-КоА-ацетилтрансфераза.

В. Оксиметилглутарил-КоА-редуктаза.

С. Оксиметилглутарил-КоА-синтетаза.

D. Ацетил-КоА-карбоксилаза.

Е. Тиолаза.

4. Назовите продукты, которые не образуются при катаболизме холестерола.

5. Выберите транспортную форму холестерола из тканей в печень.

А. ЛПОНП. В. Хиломикроны. С. ЛПНП. D. ЛПВП. Е. ЛППП.

6. Укажите конечный продукт, в который превращается мевалоновая кислота на второй стадии синтеза холестерола.

7. Назовите орган, где наиболее активно осуществляется синтез холестерола.

8. Назовите соединение, из которого синтезируется холестерол.

9. Укажите, какие функции выполняет холестерол в организме человека.

А. Обязательный компонент биологических мембран.

В. Из холестерола синтезируются желчные кислоты.

С. Предшественник кортикостероидов, половых гормонов.

D. Предшественник витамина Д₃.

Е. Все указанные функции.

10. Укажите соединение, которое образуется после конденсации трех молекул ацетил-КоА и дальнейшего восстановления в процессе синтеза холестерола.

11. При воспалительных процессах в желчном пузыре нарушаются коллоидные свойства желчи, что может привести к образованию желчных камней. Кристаллизация какого вещества является основной причиной их образования?

А. Уратов. В. Хлоридов. С. Холестерола. D. Оксалатов. Е. Фосфатов.

12. Главным восстановительным агентом в синтезе холестерола является:

А. НАДФН₂. В. ФАДН₂. С. ФМНН₂. D. КоQН₂. Е. НАДН₂.

13. Больная, 46 лет, жалуется на сухость в ротовой полости, жажду, общую слабость. При биохимическом исследовании в крови выявлена гипергликемия, гиперкетонемия. В моче найдены кетоновые тела, глюкоза. На электрокардиограмме наблюдаются диффузные изменения в миокарде. Какой вероятный диагноз?

14. Атерогенными факторами, содержащими холестерол являются:

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Поиск по сайту: