САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА. Произвести учет литического действия бактериофага на культуру бактерий качественной пробой Отто и пробой Фишера - метод “дорожки”

Произвести учет литического действия бактериофага на культуру бактерий качественной пробой Отто и пробой Фишера - метод “дорожки”. Определить фаготип культуры в иллюстрационном посеве.

2.В демонстрационных наборах определить титр бактериофага по методам Аппельмана и Грациа.

Разобрать сущность РНТФ в демонстрационном наборе чашек.

Изучить демонстрационный набор фагов

Ознакомиться с изменчивостью микроорганизмов (форма колоний, потеря пигмента, подвижности и др.) в демонстрационных посевах

Изучить схему проведения ПЦР, реагенты, аппаратура

Произвести учет результатов опытов по трансдукции, конъюгации, трансформации в готовых посевах.

• Опыт конъюгации подготовлен следующим образом:

а) донор – чувствителен к стрептомицину, но способен расти на минимальной питательной среде;

б) реципиент – устойчив к стрептомицину, но не способен расти на минимальной питательной среде (ауксотроф).

• В стерильной пробирке смешивают по 1 мл культуры донора и реципиента, помещают на 30 минут в термостат, после чего высевают смесь, а также культуры донора и реципиента на секторы минимальной среды со стрептомицином в чашки Петри. Минимальная среда содержит углеводы и не содержит аминокислот, но в ней есть стрептомицин в концентрации, задерживающей рост культуры донора. Чашки помещают в термостат. Результат подлежит учету через сутки.
• Опыт трансформации. Для постановки опыта берут в качестве реципиента культуру стафилококка, чувствительную к стрептомицину. К 1 мл бульонной культуры реципиента приливается 1 мл раствора ДНК стрептомицинорезистентного стафилококка; после чего пробирка помещают в термостат на 30 минут. Затем делается высев петлей, как из опытной пробирки, так и культуры реципиента на агар со стрептомицином. Чашки помещают в термостат. Учет результатов — через сутки.
• Опыт трансдукции. Для постановки опыта необходим фаг, размноженный на культуре кишечной палочки, разлагающей лактозу. Реципиентом является культура кишечной палочки не разлагающей лактозу. К 1 мл бульонной культуры реципиента добавляют 0,5 мл фага, смесь помещают на 3 минут в термостат. Затем делают высев на среду Эндо из смеси, а также бульонной культуры реципиента. Чашки помещают в термостат. Учет результатов - через сутки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ:

1. Научиться определять фаготип бактерий для эпидемиологических, лечебных и профилактических целей.

2. Научиться определять титр бактериофагов методами Аппельмана и Грациа.

3. Научиться регистрировать признаки фенотипической и генотипической изменчивости у микроорганизмов.

УИРС:

1. Решение ситуационных задач.
2. Освоение методов титрования бактериофагов.
3. З. Освоение диагностических проб с бактериофагом: проба Отто, РНТФ
4. Подготовка реферативных докладов.
5. Изучение фенотипической изменчивости микробов.
6. Постановка опытов трансформации, конъюгации и трансдукции микроорганизмов.
7. Оформление протоколов.

ПРОТОКОЛ ЗАНЯТИЯ:

1. Титр фага по Грациа:

2. Титр фага по Аппельману:

3. Учет реакции нарастания фага по Гольдфарбу и Тимакову:

4. Фаготип культуры:

5. Результат опыта по конъюгации:

6. Результат опыта по трансдукции:

7. Результат опыта по трансформации:

Преподаватель: Дата:

ЗАКРЕПИТЕ ЗНАНИЯ:

В чем сущность специфичности бактериофагов?

Где обитают фаги?

Перечислите основные сферы применения бактериофагов в медицине.

Каков вклад генетики микроорганизмов в развитие медицины и экономики.

Чем отличаются геномы прокариотов и эукариотов?

Какое значение в патологии человека имеют механизмы изменчивости бактерий и вирусов?

Поиск по сайту: