III ДЕНЬ-ідентифікація чистої культури

І ДЕНЬ- Посів дослідного матеріалу

І.

1. Беруть небагато матеріалу за допомогою скляної піпетки або трубочки, емульгують в ізотонічному розчині або гліцериновій суміші (у співвідношенні 1:10).

2. Залишають на декілька хвилин для осідання великих частинок.

3. Пастерівською піпеткою або петлею краплю емульсії випорожнень наносять на чашку Петрі з середовищем Ендо, Левіна або інші.

4. Стерильним шпателем розтирають її на невеликій ділянці середовища.

5. Відривають шпатель від поверхні середовища і, не пропалюючи його, розтирають матеріал, що залишився по всій поверхні середовища (для отримання ізольованих колоній).

II.

1. З матеріалу готують мазки за Грамом і мікроскопують.

II ДЕНЬ-виділення чистої культури.

1. Виймають з термостата засіяні чашки і оглядають ріст.

2. Якщо на середовищі Ендо є червоно-малинові колонії з металевим відблиском, а на середовищі Левіна (ЕМС)-фіолетові колонії, то з даних колоній роблять пробну РА на склі, для диференціації ентеропатогенних кишкових паличок від інших різновидностей ешерихій. Для цього:

А). Відбирають не менше 10 ізольованих колоній, нумеруючи їх на зворотній стороні чашки.

Б). На знежирене предметне скельце наносять 10 крапель полівалентної ОК-сироватки (або імуноглобуліну).

В). В кожну краплю вносять частинку відміченої колонії і розтирають.

3. При додатній РА решту колоній відсівають зі скошеним агаром, штрихом по косячку для виділення чистої культури.

4. Пробірки ставлять в термостат на 18-24 год при температурі 37 С.

Якщо жодна з 10 колоній не дала реакції аглютинації, дають від'ємну відповідь.

III ДЕНЬ-ідентифікація чистої культури.

1. Виймають посіви з термостата і оглядають ріст.

2. Другий раз культуру перевіряють в РА на склі з полівалентними ешерихіозними ОК-сироватками або ОК-імуноглобулінами більш вузького спектру дії- ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД, якщо виділена культура дає РА з полівалентною сироваткою, її аглютинують з кожною типовою сироваткою (імуноглобуліном) окремо в розведенні 1:5-1:10.Контролем є завісина мікробів у краплі ізотонічного розчину. Аглюти­нація з живою культурою має орієнтовне значення, бо вказує на вміст К-антигена, але не може віднести виділений штам до тієї чи іншої О-групи.

3. Здійснюють посів на напіврідкі середовища Гіса з лактозою, глюкозою, манітом, сахарозою, мальтозою.

4. Здійснюють посів на бульйон Хотінгера і Строгова з папірцями на індол і сірководень.

5. Посів у напіврідкий агар Кларка для визначення рухливості (посів уколом). Рухливі бактерії дають помутніння (перевернуту ялинку) всього середовища, нерухомі ростуть за ходом уколу.

6. Ставлять розгорнуту РА в пробірках з живою і грітою культурами та ОК-сироваткою, яка аглютинувала культуру на предметному скельці:

з живою- для визначення К-антигену,

з грітою- для визначення О-антигену.

Для постановки реакції готують антиген:

1. Змивають культуру зі скісного агару 3-5мл ізотонічного розчину;

2. Суспензію розливають у 2 пробірки.

3. Одну з них прогрівають на водяному нагрівачі при температурі 100°С 60 хв для зруйнування поверхневих антигенів. Розгорнуту реакцію аглютинації ставлять у двох рядах пробірок.

Поиск по сайту: