Подписи к рисункам

Рисунок 1. Двухцветная FISH с хромосомоспецифическими ДНК-пробами (WCP5 –зеленый сигнал, WCP20 – красный сигнал). Хромосомы 2, der(2), 5 и der(5) указаны стрелками и подписаны.

Рисунок 2. Интенсивность свечения хромосом человека в проточной цитофотометрии при окраске Hoechst 33258 и хромомицином А3.

Рисунок 3. Принципиальная схема ПЦР с частично вырожденным праймером (DOP-PCR): а – денатурация матричной ДНК; б – отжиг частично вырожденного праймера в низкотемпературных циклах; в – построение первой цепи амплифицируемого фрагмента; г – отжиг праймера на первой цепи амплифицируемого фрагмента; д – синтез второй цепи амплифицируемого фрагмента, е-ж - синтез амплифицируемого фрагмента. Амплификация фрагмента ДНК, фланкированного DOP-праймером, проводиться в стандартной ПЦР.

Рисунок 4. Микродиссекция метафазных хромосом: а – GTG-дифференциально окрашенные хромосомы; б – выделение короткого плеча хромосомы 7; в - материал короткого плеча хромосомы 7 на игле, поднятой над препаратом; г – перенос материала короткого плеча хромосомы 7 в 40 нл каплю раствора в оттянутом носике пипетки; д – FISH микродиссекционной ДНК-пробы с метафазными хромосомами (слева: сигнал FISH в 7р – зеленый, окраска DAPI – красный; справа – только окраска DAPI)/

Рисунок 5. Визуализация ДНК-пробы, меченной биотином, с помощью стрептавидина, конъюгированного с флуорохромом.

Рисунок 6. LSI ДНК-пробы хромосомы 15 для детекции синдромов Прадера-Вилли и Ангельмана.

Рисунок 7. LSI ДНК-пробы для хромосом 8 и 21 (а, б), организация районов хромосом 8 и 21, вовлекаемых в формирование транслокации t(8;21)(q22;q22), характерной для острого миелоидного лейкоза типа М2, и пробы, используемые для ее выявления (в). Детекция транслокации t(8;21)(q22;q22), характерной для острого миелоидного лейкоза М2 типа, с использованием ДНК-проб LSI AML1 и LSI ETO. Красные сигналы соответствуют району 8q22 (указаны стрелками), зеленые – району 21q22 (указаны головками стрелок). Желтые сигналы (совмещение красных и зеленых, указаны стрелками и головками стрелок) соответствуют районам транслокаций (г – норма, д – ядро с t(8;21)).

Рисунок 8. Детекция inv(16)(p13;q22)или t(16;16)(p13;q22) с использованием 16q специфичной ДНК-пробы у больных с острой миелоидной лейкемией. Черная стрелка указывает на нормальную хромосому 16, белая – на inv(16)(p13;q22)или t(16;16)(p13;q22).

Рисунок 9. Детекция inv(16)(p13;q22)или t(16;16)(p13;q22) с использованием LSI CBFB: а – схема района разрыва в 16q22; б – LSI ДНК-пробы для хромосомы 16; FISH c LSI CBFB (в – норма, г – ядро с inv(16)(p13;q22)или t(16;16)(p13;q22)).

Рисунок 10.Вариант комбинации флуорохромов для мечения цельнохромосомных ДНК-проб (24-цветная FISH).

Рисунок 11. Последовательная регистрация микроизображений метафазной пластинки после FISH с комбинаторномеченными пробами.

Рисунок 12. Окрашивание хромосомы 1 человека после RxFISH. Слева - схема гибридизации, справа – результат RxFISH.

Рисунок 13. Многоцветное окрашивание хромосомы 5 человека (слева), приведены результаты FISH семи районоспецифичных ДНК-проб; профили интенсивности пяти флуорохромов, использованных для их мечения; результаты перевода интенсивности сигналов в псевдоцвета; схема GTG-окрашивания хромосомы 5 человека.

Рисунок 14. Анализ аномальной хромосомы der(3)t(3;?). а – GTG-дифференциальная окраска хромосом (указан неидентифицируемый район в 3р); б – FISH микродиссекционной ДНК-пробы, полученной из аномальной хромосомы 3р+ с хромосомами здорового донора (белая стрелка указывает на район 10(q24.3→qter), черная стрелка – на точку разрыва 3р); в - FISH WCP3 c метафазными хромосомами пациента (стрелки указывают на дополнительный район в хромосоме 3р+); г - FISH WCP10 c метафазными хромосомами пациента (белая стрелка указывает на район 10(q24.3→qter) в хромосоме 3р+);, черные стрелки – на хромосомы 10); д – схема хромосомы der(3)t(3;10)(3p25;q24.3).

Рисунок 15. Анализ аномальной хромосомы der(6). а – FISH микродиссекционной ДНК-пробы, полученной из аномальной хромосомы der(6) с хромосомами здорового донора (стрелки указывают на район делеции. Красный сигнал – сигнал ДНК-пробы, зеленый сигнал – репликационный бэндинг, полученный введением BrdU); б – схема хромосомы del(6)(q23.1→27).

Рисунок 16. Анализ врожденных хромосомных аномалий при отсутствии препаратов метафазных хромосом пациента удовлетворительного качества. FISH микродиссекционных ДНК-проб, приготовленных из аномальных хромосом, с метафазными хромосомами здоровых доноров: а – FISH микродиссекционных ДНК-проб хромосом der(6)t(6;15) (зеленый сигнал) и der(15)t(6;15) (красный сигнал); б - FISH микродиссекционной ДНК-пробы хромосомы r(14) (зеленый сигнал).

Рисунок 17. 24-х цветная FISH, хромосомная диагностика острой миелолейкемии. M-FISH: а – раскладка хромосом по результатам M-FISH (интактная хромосома слева, дериват справа); б – классификатор псевдоцветов.

Рисунок 18. 24-х цветная FISH, хромосомная диагностика острой миелолейкемии. SKY: а – инвертированный DAPI бэндинг; б – классификация хромосом метафазной пластинки по результатам SKY; в – раскладка хромосом по результатам SKY (интактная хромосома слева, дериват справа); г – классификатор псевдоцветов.

Рисунок 19. Многоцветный бэндинг хромосомы der(1)t(1;5;8;20), хромосомная диагностика острой миелолейкемии: а - многоцветный бэндинг хромосом интактных хромосом; многоцветный бэндинг районов 1, 5, 8 и 20 хромосом в составе der(1)t(1;5;8;20). Район 5q11.1 не выявлен.

Рисунок 20. Определение состава хромосомы der(1), хромосомная диагностика острой миелолейкемии получением микродиссекционной ДНК-пробы аномальной хромосомы и FISH с метафазными хромосомами пациента (а, указана хромосома der(1)) и здорового донора (б, указаны районы, несущие сигнал после FISH c микродиссекционной ДНК-пробой аномальной хромосомы).

Рисунок 21. Обратная гибридизация in situ ДНК-пробы, полученной из SMC с неоцентромерой, дала интенсивный сигнал на SMC (указанf стрелкой), но не окрасила ни один районов нормальных хромосом пациента.

Поиск по сайту: