Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика основана на обнаружении возбудителя в фекалиях и выявлении иммунологических сдвигов путем обследования парных сывороток больных.

Материалом для исследования являются фекалии. Фекалии отбирают стерильно и доставляют в лабораторию в контейнерах со льдом. Готовят 10—20% суспензию фекалий на растворе Хенкса. После осветления на низкой скорости надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками.

Быстрая диагностика.

Быстрая диагностика основана на выявлении вирусных частиц или антигенов в фекалиях больных с помощью методов ЭМ, ИЭМ, РИФ и ИФА. В качестве иммунных сывороток используют гипериммунные сыворотки лабораторных животных (кроликов, морских свинок), иммунизированных ротавирусами животных (SA 11 или вирус диареи телят Небраски), или сыворотки больных, в стадии выздоровления.

Поскольку большие количества вируса выделяются с фекалиями, вирусные частицы можно выявить при прямой ЭМ экстрактов фекалий. При взятии материала на 1—3-й день после начала заболевания получают максимальное число положительных ответов (до 100), на 3—5-й день — до 50%, на 5—8-й день — до 25%.

При ИЭМ гипериммунную сыворотку смешивают с экстрактом фекалий больного, смесь инкубируют при комнатной температуре, а затем при температуре 4°С, после чего центрифугируют для осаждения специфических вирусных агрегатов. Осадок ресуспендируют в нескольких каплях дистиллированной воды и материал контрастируют с помощью фосфорновольфрамовой кислоты. В препаратах видны компактные агрегаты, состоящие из вирусных частиц, окруженных ореолом антител.

Вирусный антиген в экстрактах фекалий можно определить с помощью твердофазных радиоиммунного и иммуноферментного анализов. Чувствительность этих методов примерно одинакова. Их преимуществом перед методом ЭМ является возможность исследования большого количества проб и точный количественный учет результатов. С помощью этих реакций, а также РСК и РПГ выявляются в основном группо-и подгруппоспецифические антигены, общие для ротавирусов человека и животных, в то время как в РН выявляются типоспецифические антигены.

Быструю диагностику можно провести также путем выявления вирусных РНК в экстракте фекалий с помощью метода МГ(молекулярной генетики) при использовании в качестве зонда плазмиды, содержащей гены ротавируса, а также путем электрофореза РНК, выделенной из экстракта фекалий, в полиакриламидном геле. Фрагменты РНК выявляют путем окрашивания геля бромидом этидия. Этот метод более чувствителен, чем ЭМ.

Серологическая диагностика.

Прирост антител в парных сыворотках больных определяют с помощью антигенов ротавирусов животных, близких в антигенном отношении ротавирусу человека, вируса диареи телят Небраски и обезьяньего вируса SA11 Эти вирусы адаптированы к культуре клеток и дают выраженный цитопатический эффект. Антитела выявляют в РН в культуре ткани, РСК, РТГА с эритроцитами человека группы 0 или эритроцитами морской свинки. Сыворотки предварительно обрабатывают каолином и > 50% эритроцитарной массой.

Поиск по сайту: