АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Антителообразование

Читайте также:
  1. Алгоритм лабораторной диагностики МИ
  2. Бактерицидная активность лизоцима слюны
  3. Конституциональные факторы естественной резистентности
  4. Лекция. Патология лейкоцитов.
  5. Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток
  6. Особенности нозологии
  7. Подпись преподавателя_______________________________________________________
  8. Противоопухолевый иммунитет
  9. Спектр действия интерлейкинов
  10. СРЕДСТВА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ИММУНИТЕТ
  11. Теоретическая справка

Образование антител как иммунная реакция на антиге­ны происходит в лимфоидной ткани периферических ор­ганов иммунитета, главным образом, в лимфатических узлах и белой пульпе селезенки. Продуцентами антител являются плазмоциты.

Общая иммунная реакция на антиген. Синтез антител начинается в тимуснезависимой зоне и в стенках лимфа­тических синусов, сопровождаясь общим нарастанием клеточности лимфоузлов, увеличением в них центров размножения с большим количеством митотически деля­щихся лимфоцитов, появлением вокруг них и в медулляр­ных тяжах плазматических клеток. В первые сутки после введения антигена резко снижается выход лимфоцитов из лимфатических узлов, а в последующие 3-4 дня, наобо­рот, значительно возрастает, что ведет к интенсивной миг­рации (расселению) стимулированных лимфоцитов через кровь во все лимфоидные ткани.

Фазы антителообразования. В динамике образования антител различают две фазы - индуктивную (латентную) и продуктивную, или репродуктивную.

Индуктивной фазой называют отрезок времени меж­ду введением антигена и появлением следов иммуногло­булинов или первых плазмоцитов. В этой фазе происходит распознавание антигена. Он фагоцитируется макро­фагами (пиноцитируется) или связывается ими. Если вслед за этим антиген полностью разрушается, то анти­тела не вырабатываются. Антителогенез происходит лишь при частичной деградации антигена. В таком слу­чае в лимфоидной ткани, где происходит связывание ан­тигена, отмечаются массовая гибель и, параллельно, пролиферация клеток, появляется большое количество фагоцитов, увеличивается содержание гистамина, гепа­рина, серотонина и других веществ, усиливающих воспа­ление. На этом фоне в конце индуктивной фазы начина­ется взаимодействие (кооперация) между вспомогатель­ными А-клетками, на мембране которых находится из­мененный антиген, Т- и В-лимфоцитами, в результате чего молодые В-лимфоциты, или предшественники плаз­моцитов, получают сигнал к пролиферации и дифферен­циации (рис. 63).

Индуктивная фаза очень лабильна и длится примерно 20 ч. Начавшийся процесс антителообразования в ней можно приостановить воздействием неблагоприятных для организма факторов. Легче всего это удается с помощью радиации, вследствие чего индуктивную фазу антителогенеза называют радиочувствительной.

 

Рис. 63. Трансформация В-лимфоцитов в антителообразующие

Клетки

В продуктивной фазе происходит интенсивный синтез антител. Приостановить его не удается даже радиооблуче­нием, и поэтому продуктивную фазу называют радиорезистентной. В этой фазе иммунного ответа усиливается кооперация иммунокомпетентных клеток, и сильно воз­растает деление В-лимфоцитов. На смену молодым плаз-мобластам (иммунобластам) в лимфоидной ткани прихо­дят юные плазмоциты, а затем - и зрелые.

При первичном иммунном ответе максимальное коли­чество плазмоцитов в селезенке и лимфатических узлах появляется на 7-е сут. Это совпадает с высоким титром ан­тител в крови. Повторное введение чужеродного антигена сопровождается необычно интенсивным антителообразо-ванием - высокий титр антител возникает уже на 3-4-е сут, что связано с наличием в организме первично имму­низированных особей клеток иммунологической памяти, не закончивших полный цикл трансформации (см. «Иммунный ответ»).

Продуктивная фаза антителообразования сравнитель­но непродолжительна. Применительно к одному клону она продолжается около 10 сут, но по отношению ко мно­гим из них - может удлиняться до нескольких недель. Од­нако через 2-3 мес. титр антител в крови переболевших инфекционными заболеваниями резко снижается.

Функциональные особенности плазмоцитов. Касаясь функциональных особенностей плазмоцитов, следует под­черкнуть, что они, в известном смысле, могут рассматри­ваться как своеобразные одноклеточные белковые желе­зы. Плазмоциты секретируют иммуноглобулины по го­локриновому или мерокриновому типу. Как правило, плазмоциты образуют антитела одной иммунологической специфичности, например Н- или О- антитела к соответ­ствующим жгутиковым и соматическим антигенам бакте­рий. Более того, при наличии в молекуле антигена двух разных детерминант плазмоцит вырабатывает антитела против одной из них. Только 0,01 % плазмоцитов проду­цирует оба антитела. Большинство плазмоцитов синтези­рует лишь один класс тяжелых и один тип легких цепей одновременно. Первичный иммунологический ответ обычно начинается с синтеза макроглобулинов М с конс­тантой седиментации 19S. При вторичном ответе на анти­ген образуются микроглобулины G с константой 7S. Боль­шая часть плазматических клеток образует антитела с константой седиментации либо 7S, либо 19S.

Развитие клона плазмоцитов, начиная от плазмобласта до зрелой формы, занимает 5-6 сут. Жизненный цикл плазмоцитов, продуцирующих тот или иной вид антител, не превышает 48 ч. При этом вырабатывающиеся клоном плазмоцитов антитела представляют собой широкий спектр иммуноглобулинов, отличающихся как по специфичности по отношению к различным детерминантам ан­тигена, так и по авидности.

Моноклональные антитела. Методику получения высо­коспецифических антител с большей степенью авидности к определенной детерминантной группе антигена разработа­ли Ц. Милыптейн и Г. Келер, создав бессмертные клоны В-клеток, которые называют гибридомами. Гибридомы получают путем слияния нормальных по продолжительности жизненного цикла лимфоцитов, продуцирующих антите­ла, с опухолевыми (бессмертными) дефектными линиями В-клеток, неспособными к секреции иммуноглобулинов.

Схематически это осуществляют следующим образом. Антигеном, который имеет, например, две или больше де­терминант, иммунизируют мышей или крыс. Получив лим­фоциты селезенки, продуцирующие соответствующие к ним антитела, с помощью полиэтиленгликоля разрушают их клеточные стенки и сливают с опухолевыми В-клетками.

Затем взвесь клеток высевают на элективную для гиб­рида ГАТ-среду, содержащую гипоксантин, аминоптерин и тимидин, но неблагоприятную как для нормальных лимфоцитов, так и для опухолевых В-клеток.

Получить чистый клон гибридом в ГАТ-среде удается только в том случае, если в лунке микропанели для куль­тур клеток будет находиться одна особь гибрида. Каждая гибридома наследует присущие родительским клеткам свойства: от антителообразующей - способность продуци­ровать высокоспецифические иммуноглобулины к строго определенному эпитопу, а от опухолевой В-клетки — спо­собность к перевиваемости и неограниченному росту.

Имея одинаковые структуру, идиотип и специфич­ность, моноклональные антитела нашли широкое приме­нение в идентификации различных видов микроорганиз­мов, субпопуляций лимфоцитов, определении совмести­мости групп крови, диагностике опухолей, серотерапии инфекционных заболеваний, новообразований и во мно­гих других областях биологии и медицины.

Иммунный ответ

Иммунный ответ - это антигенспецифическая реакция, развивающаяся в ответ на воздействие конкретного анти­гена и направленная на его распознавание, разрушение и удаление. В основе развития иммунного ответа лежит взаи­модействие иммунокомпетентных клеток, определяющих выбор клеток, включаемых в ответную реакцию на анти­ген и трансформацию их в эффекторные клетки.

Общие механизмы распознавания антигенов и образо­вание эффекторных клеток. Проникающие в организм ан­тигены, будь то клетки или молекулы, в нативном (природном) виде не распознаются как генетически чужерод­ные метки (исключением являются В-лимфоциты). Им­мунная реакция их распознавания начинается с фагоцито­за антигена макрофагами крови и тканей или с его связы­вания с дендритными клетками стромы лимфоидных орга­нов. В макрофагах они могут полностью разрушаться, но чаще расщепляются до промежуточных продуктов. В частности, большинство антигенов в течение часа в лизосомах фагоцитов подвергаются ограниченной денатурации и про-1еолизу или, как чаще говорят, процессингу. Оставшиеся в них пептиды (9-10 - 12-25 остатков аминокислот), называемые номинальным антигеном, комплексируются с репрессированными на внешней мембране макрофагов молекулами МНС класса II и в таком состоянии представляются для распознавания. В дендритных клетках антиген тоже процессируется, но может оставаться, как на па-нхиматозных клетках, в неизмененном виде. В случае процессинга переструктурированный в них антиген комплексируется с молекулами МНС класса II и класса I. Макрофаги, дендритные и некоторые другие вспомогательные клетки, несущие на внешней мембране комплек-молекул МНС с включенными в них пептидами, предназначенные для распознавания антигена, называются антигенпрезентирующими (presentatio - предъявление), мембранные комплексы антигенпрезентирующих клеток познают Т-лимфоциты. Таким образом, Т-лимфоциты познают не антиген как таковой, а его фрагменты, изменяющие структуру антигенов главного комплекса гистосовместимости, т. е. «измененное свое».

Одновременно с распознаванием антигена происходит контактное взаимодействие антигенпрезентирующих клеток и Т-лимфоцитов с помощью комплементарных поверхностных молекул, что обеспечивает их взаимную адгезию и секрецию антигенпрезентирующими клетками цитокинов, которые вызывают сначала активацию Т-лимфоцитов, а затем - пролиферацию и их дифференциацию в эффекторные клетки. К

Кооперация иммунокомпетентных клеток в гуморальном иммунном ответе. Иммунный ответ в виде антителообразования происходит при распознавании В-клеткой гена, который индуцирует ее пролиферацию и дифференциацию в плазмоциты. Прямое воздействие на В-клетку без участия Т-клеток могут оказывать только тимуснезависимые антигены. По механизму стимулирую­щего действия их разделяют на два типа: тип 1, к которо­му относятся бактериальные липополисахариды, и тип 2, включающий полисахариды стрептококков, полимеры D-аминокислот, поливинилпирролидон, полимеризованный флагеллин, не подвергающиеся деградации в лизосомах макрофагов. Тимуснезависимые антигены типа 1 стиму­лируют деление В-клеток неспецифически, воздействуя как митогены. Антигены типа 2 с многократно повторяю­щимися детерминантами реагируют с иммуноглобулино-выми рецепторами В-клеток. При этом в специфическом механизме активации В-клеток, кроме них, участвуют макрофаги, выделяя цитокины, стимулирующие их деле­ние и трансформацию в плазмоциты.

Гуморальный иммунный ответ на тимусзависимые ан­тигены начинается со связывания антигена рецептором В-лимфоцитов. Образующийся при этом на мембране В-лимфоцита комплекс IgM+Ar погружается внутрь клетки, где после процессинга и связывания с цитоплазматическими молекулами МНС класса II презентируется на его поверх­ности для распознавания Т-хелпером. Таким образом, в мо­лекуле тимусзависимого антигена существует два набора эпитопов. Один из них распознается антигенспецифически-ми рецепторами BCR В-лимфоцитов, а второй, формируе­мый внутри В-клетки, распознается СБ4+-Т-хелперами. Эпитоп первого набора, распознаваемый В-клеткой, может иметь различную химическую структуру, например поли-сахаридную или белковую, а эпитоп второго набора, распо­знаваемый Т-хелперами, - только белковую. Естественно, что по отношению к эпитопам первого набора В-клетка яв­ляется распознающей, а к эпитопам второго набора - презентирующей. В результате распознавания Т-хелпером эпитопов второго набора с помощью TCR-рецептора при участии корецептора CD4 и костимулирующих молекул CD28 и CD40L, взаимодействующих, как это показано на рис. 64, с соответствующими им молекулами CD80 и 40, Т-хелперы (ТхО) дифференцируются в Тх2-хелперы, выделя­ющие ИЛ-4, под влиянием которого В-клетка дифференци­руется в плазмоцит, секретирующий антитела.

Кооперация иммунокомпетентных клеток в цитотоксических реакциях. Цитотоксической называют иммун­ную реакцию, приводящую к формированию цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ), способных разрушать инфи­цированные или опухолевые (мутантные) клетки с экспрессируемым опознавательным антигеном на их по­верхности. В качестве антигенпрезентирующих клеток, как это представлено на рис. 65, в ней участвуют дендрит­ные клетки или макрофаги, презентирующие антигенный пептид в комплексе с молекулами МНС класса II Т-хелперам (С04+-клеткам), а в комплексе с МНС класса I - пре-Цитотоксическим лимфоцитам (СБ8+-клеткам). Для акти­вации тех и других клеток обязательна костимуляция, обусловленная взаимодействием молекул CD80 антиген-презентирующих клеток с корецептором CD28 Т-лимфо­цитов. Распознавшие презентированный антигенный пеп­тид СБ4+-клетки продуцируют интерферон γ, активирую­щий антигенпрезентирующие клетки, а распознавшие ан­тигенный пептид СБ8+-клетки подвергаются бласттранс­формации, экспрессируя молекулы-рецепторы для ИЛ-2, который крайне необходим им для превращения в ЦТЛ и последующего размножения. Источником ИЛ-2 для ЦТЛ на первом этапе служат активированные вместе с ними ТхО-хелперы. Допускается, что на более поздних этапах ИЛ-2 начинают сами вырабатывать СВ8+-клетки, стимули­рованные антигенпрезентирующими клетками, т. е. обеспечивают свое размножение по аутокринному механизму.

В отличие от Т-хелперов, нуждающихся для продол­жительной пролиферации в контакте с АПК и в действии многих цитокинов, поддержание размножения активиро­ванных ЦТЛ обеспечивается одним ИЛ-2. Интересно, что, стимулируя размножение ЦТЛ, этот цитокин вместе с тем усиливает экспрессию к нему рецепторов и интенсифици­рует дальнейшую его выработку. Завершившие деление ЦТЛ, ничем не отличающиеся по внешним признакам от преСБ8+-клеток, выселяются из паракортикальных зон лимфоузлов и, попав в циркуляцию, разносятся в различ­ные органы и ткани, где могут разрушать инфицирован­ные и перерождающиеся клетки.

Главным результатом дифференциации ЦТЛ является реализация иммунного цитолиза. Отличается он от неим­мунного, вызванного NK-киллерами, тем, что происходит через определенное время, необходимое для формирова­ния активных Т-киллеров. Клетки-мишени распознаются такими киллерами по комплексам антигенных пептидов с молекулами МНС класса I, но без участия антигенпрезентирующих клеток. Механизм иммунного Т-клеточного Цитолиза почти таков же, как NK-зависимого, т. е. после установления тесной связи с клеткой-мишенью в зону их межклеточного контакта из гранул ЦТЛ поступают перфорин и гранзимы (фрагментины), которые после актива­ции в присутствии ионов Са2+ перфорируют мембрану ми­шени и внутри клетки фрагментируют ДНК. В отличие от NK-зависимого, в клеточном цитолизе могут участвовать и другие цитотоксические вещества, например лимфотоксин и фактор некроза опухолей, а также выделяемый Т-хелперами и Txl-клетками интерферону, усиливающий экспрессию молекул гистосовместимости на поверхности клеток-мишеней, что способствует распознаванию чуже­родного пептида.

Таким образом, в отличие от дифференциации лимфо­цитов при созревании, в процессе которой формируются антигенраспознающие клетки, их дифференциация в им­мунном ответе направлена на образование эффекторных клеток. Так, в гуморальном ответе происходит формиро­вание крупных плазматических клеток с обильной цитоплазмой, и они переходят от синтеза мембранных иммуно­глобулинов, имеющихся у В-лимфоцитов, к секреции рас­творимых lg, а при клеточном цитотоксическом ответе -цитотоксических лимфоцитов, синтезирующих вещества, разрушающие клетки-мишени, и цитокины, регулирую­щие активацию, рост и дифференциацию лимфоцитов и эффекторных клеток воспаления. При этом в гумораль­ном ответе в качестве антигенпрезентирующих клеток обычно выступают В-лимфоциты, а Т-хелперами служат Тх2-клетки, а в цитотоксическом - дендритные клетки и ТхО- или Txl-клетки.

Регуляторами иммунного ответа по-прежнему, можно считать, являются Т-супрессоры, которые в процессе об­разования иммуноглобулинов и в реакциях цитолиза бло­кируют выработку аутоантител и обеспечивают толерант­ность к собственным тканям и органам.

Клетки памяти. Параллельно с образованием плазмо-цитов и ЦТЛ формируются клетки памяти.

В-клетки памяти представляют собой особую линию дифференциации. Они образуются в зародышевых цент­рах вторичных фолликулов лимфатических узлов. Реша­ющим моментом индукции В-клеток памяти является СБ40-опосредованное взаимодействие предшественников В-клеток с Т-хелперами. Их фенотип, если не считать экспрессии молекул CD45RO, практически не отличается от фенотипа обычных В-клеток. Рецепторы этих клеток обладают более высоким сродством к антигену, и они лег­ко активируются, контактируя с Т-клеткой при представ­лении ей антигенного пептида и действии Т-клеточных цитокинов, что имеет значение для быстрого выхода В-клеток памяти в пролиферацию. Формирование В-клеток, ответственных за иммунологическую память, обеспечива­ющих быструю элиминацию антигенов и абсолютную ус­тойчивость к реинфекции, отличается интересными зако­номерностями. В течение 10-20 дней после первичной им­мунизации их количество неуклонно возрастает. Затем оно держится на постоянном уровне в течение нескольких месяцев, а иногда и лет. У клеток иммунологической па­мяти все направления синтеза иммуноглобулинов, за исключением одного, репрессированы, и для них антиген слу­жит директивным включателем уже детерминированной пролиферации и дифференциации, которая заканчивает­ся образованием плазмоцитов за 2-3 дня.

Менее изучены Т-клетки памяти. Так как они имеют все основные маркеры Т-лимфоцитов, включая рецептор-ный комплекс CD3-TCR, вспомогательные и адгезивные молекулы, то считается, что Т-клетки памяти относятся к их долгоживущим вариантам. Наиболее специфическим признаком Т-клеток памяти является экспрессия на их поверхности тех же молекул CD45RO и отсутствие CD45RA. В популяции Т-клеток памяти имеются как СБ4+-клетки, так и СВ8+-лимфоциты, но преобладают первые. Все они формируются в паракортикальной зоне лимфоузлов и параартериальных муфтах селезенки.

 

 

Цитокины

Общие свойства. Цитокинами (cytos - клетка, kineo -возбуждаю) называют вещества, активирующие и коорди­нирующие взаимодействие клеток. По структуре они яв­ляются гликопротеинами с молекулярной массой от 8 кД до 80 кД, а по эффекту действия - медиаторами. Выраба­тываются при иммунном ответе, развитии воспаления и кроветворении, регулируя и стимулируя их. Обладают по­тенцирующим и аддитивным действием. Однако могут оказывать и противоположный эффект. Быстро синтези­руясь (в течение 1-4-24 ч), они в короткие сроки расходу­ются или выводятся из кровотока через почки. При угасании иммунной реакции синтез цитокинов прекращается. Сродство к цитокинам определяется наличием на мембра­нах клеток специфических рецепторов, но многие из них отличаются плейотропизмом.

Продуценты цитокинов. Цитокины вырабатывают Т-лимфоциты, В-лимфоциты, NK-клетки, моноциты-макро­фаги, дендритные и другие клетки соединительной ткани.

Классификация цитокинов. Цитокины лимфоцитов называют лимфокинами, моноцитов - монокинами, кле­ток стромы - гемопоэтинами {haima — кровь, poiesis -вы­работка). При этом лимфокины регулируют активацию, рост и дифференциацию лимфоцитов, монокины стиму­лируют неспецифические эффекторные клетки воспале­ния, а гемопоэтины - процессы кроветворения.

Независимо от того, какими клетками вырабатываются цитокины, они подразделяются на четыре группы: интерлейкины (inter - взаимно, leukos -белый), координирую­щие взаимодействие между лейкоцитами; интерфероны (ИФН), обладающие противовирусной активностью; фак­торы некроза опухолей (ФНО), разрушающие мутантные клетки (см. «Противоопухолевый иммунитет»); колоние-стимулирующие факторы (КСФ), вызывающие экстраме­дуллярные (внемозговые) очаги кроветворения. Отдельно выделяют трансформирующий фактор роста Р (ТФРР).

В норме без антигенной стимуляции иммунной системы в кровотоке обнаруживаются небольшие количества цито­кинов, в основном цитокины стромальных клеток и моно­цитов, стимулами для секреции которых могут, по-види­мому, служить контакты с окружающими клетками, мета­болиты и многие другие факторы. В отсутствие стимуля­ции лимфокины не выделяются, и покоящиеся лимфоци­ты обычно на них не реагируют. Активированные клетки начинают продуцировать цитокины в ближайшие часы. Так, монокины и гемопоэтины обнаруживаются спустя 1ч, интерлейкины - через 2 (ИЛ-2), 4 (ИЛ-4), 6 ч (ИЛ-10). Пик выработки моно- и гемопоэтинов приходится на 3-14-й ч, а большинства интерлейкинов - на 2-3 сут.

Биологическая характеристика цитокинов. В настоя­щее время описано около 20 интерлейкинов, два ФНО (α и β), три ИНФ (α, β и γ), три КСФ.

Таблица 5. Основные клетки-продуценты и их цитокины

 

Клетки- Группы цитокинов
продуценты ил ИФН ФНО КСФ ТФР
ТхО 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10,13,14 γ α,β гм-  
Txl 2,3 Y α,β гм-  
Тх2 3, 4, 5, 6, 9, 10, 13, 14   α гм-  
цтл 2,3,4, 5,6,9,10,13,16 У α.β гм-  
NK-клетки 1,8, 12 У β гм-  
В-клетки 1, 4,10,12 а α    
Моноциты-макрофаги 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8,10,12,15 α, β α ГМ-, г- β
Дендритные клетки 1, 6,12        

 

Как видно из табл. 5, наибольший спектр цитокинов синтезируют ТхО, но продуцируют они их в очень малом количестве. Более высокий уровень цитокинов секретиру-ют воспалительные Txl- и иммунные Тх2-лимфоциты. Цитотоксические лимфоциты образуют тоже большое ко­личество цитокинов, но интенсивность их секреции на­много ниже, чем у всех трех типов хелперов, моноцитов-макрофагов и клеток стромы.

 


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |

Поиск по сайту:



Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.007 сек.)