Приготовление мазков для окраски по Граму

1. Предметные стекла хранятся в широкогорлой банки с притертой пробкой в жидкости для

обезжиривания стекол (например смесь Никифорова). Пинцетом вынимают нужное количество
предметных стекол на марлевую салфетку и натирают их другой марлевой салфеткой. Стекла нужно
брать только за ребра, так как следы жира на руках могут отпечататься на стеклах. На хорошо
обезжиренном стекле капля воды растекается.

2. С обратной стороны стекла в центре маркером рисуют кружок размером с 10-копеечную монету.

3. Устанавливают стекло над кюветой на мостике.

4. В асептических условиях наносят в центр кружка бактериологической петлей каплю
физ.раствора.

5. Фламбируют петлю и берут ею небольшое количество материала с твердой питательной

среды и осторожно эмульгируют его в капле. Фламбируют петлю

6. Мазок подсыхает на воздухе.

7. Правильно выполненный мазок имеет равномерно мутную поверхность.

Фиксация мазков

Цель фиксации: - происходит убивка микроорганизмов и мазок становится
безопасным для работы, поэтому до фиксации мазок можно брать только пинцетом.

- м/о прочно прикрепляются к поверхности стекла и не смываются при окраске.

Фиксируют только сухой мазок. Если зафиксировать влажный мазок, 1'0 происходит грубая
коагуляция белков и мазок после окрашивания будет «грязным».

Зафиксировать мазок можно физическим и химическим способом.

Физическая фиксация: берут мазок пинцетом и трижды проносят над пламенем спиртовки.
Правильность фиксации контролируют путем легкого прикосновения к тыльной стороне ладони
нижней поверхностью стекла. При этом появляется очень легкое чувство жжения.

Химическая фиксация: высушенный мазок погружают в стаканчик со смесью Никифорова или
метиловым спиртом на 15-45 минут в зависимости от толщины мазка.

Окраска по Граму

Принцип окраски: у грамм - положительных бактерий при взаимодействии с генцианвиолетом
образуется прочный нерастворимый комплекс с тейхоевыми кислотами который не вымывается при
обесцвечивании спиртом, поэтому при докрашивании фуксином клеточная стенка остается
окрашенной в фиолетовый цвет. У грамм-отрицательных м/о тейхоевые кислоты отсутствуют, поэтому
при обесцвечивании спиртом генцианвиолет вымывается, а клеточная стенка обесцвечивается. При
дополнительной окраске фуксином клеточная стенка им окрашивается, приобретает красный цвет.

Результат окрашивания по Граму:

Грамм-положительные м/ о - темно фиолетового цвета
Грамм-отрицательные м/о - красного цвета.

Поиск по сайту: