Работа с микроскопами изучение мазков крови человека и лягушки

1) Составные компоненты крови: форменные элементы (эритроциты, тромбоциты, лейкоциты) и плазма крови.

2) Морфофункциональная характеристика эритроцитов:

1. Размеры: нормоциты – 7,0 – 7,9 мкм; макроциты – больше 8,0 мкм; микроциты – меньше 6,0 мкм.

2. Форма: двояковогнутые диски - дискоциты (80 %); остальные 20 % составляют сфероциты, планоциты, эхиноциты, седловидные, двуямочные, стоматоциты.

3. Ядро: не содержат.

4. Цитоплазма: заполнена пигментным включением – гемоглобином, нет большинства органелл.

5. Функции: дыхательная - транспорт газов (О2 и СО2); транспорт других веществ, абсорбированных на поверхности цитолеммы (гормонов, иммуноглобулинов, лекарственных веществ, токсинов и других).

6. Изменение количества в крови: у человека в 1 мм³ крови 4,5—5 млн

7. Продолжительность жизни: около 120 дней.

8. Место гибели: преимущественно селезенка.

3) Лейкоформула здорового взрослого человека - это процентное соотношение различных форм лейкоцитов (к общему числу лейкоцитов - 100 %). В таблице классификации лейкоцитов представлена лейкоцитарная формула здорового организма.

4) Морфофункциональная характеристика гранулоцитов

1. Типы клеток: нейтрофилы: юные; палочкоядерные; сегментоядерные; эозинофилы; базофилы.

2. Размеры: колеблется в приделах 9-13 мкм

3. Форма:

Нейтрофилы: в цитоплазме имеются мелкие гранулы, окрашивающиеся в слабо оксифильный (розовый) цвет, среди которых различают неспецифические азурофильные гранулы - разновидность лизосом, специфические гранулы, другие органеллы развиты слабо.

Эозинофилы: в цитоплазме крупная оксифильная (красная) зернистость, состоящая из двух типов гранул: специфические азурофильные - разновидность лизосом, содержащих фермент пероксидазу, неспецифические гранулы, содержащие кислую фосфатазу, другие органеллы развиты слабо.

Базофилы: в цитоплазме содержатся крупные гранулы, окрашивающиеся основными красителями, метахроматично, за счет содержания в них гликозоаминогликанов - гепарина, а также гистамина, серотонина и других биологически активных веществ; другие органеллы развиты слабо.

4. Ядро:

Нейтрофилы: сегментированное ядро;

Эозинофилы: двухсегментное ядро;

Базофилы: крупное слабо сегментированное ядро;

5. Функции:

Нейтрофилы: фагоцитоз бактерий; фагоцитоз иммунных комплексов (антиген-антитело); бактериостатическая и бактериолитическая; выделение кейлонов и регуляция размножения лейкоцитов.

Эозинофилы: участвуют в иммунологических (аллергических и анафилактических) реакциях; угнетают (ингибируют) аллергические реакции посредством нейтрализации гистамина и серотонина.

Функции базофилов заключаются в участии в иммунных (аллергических) реакциях посредством выделения гранул (дегрануляции)и содержащихся в них вышеперечисленных биологически активных веществ, которые и вызывают аллергические проявления (отек ткани, кровенаполнение, зуд, спазм гладкой мышечной ткани и другие).

6. Продолжительность жизни: от нескольких часов до нескольких месяцев, предположительно 8 дней.

5) Морфофункциональная характеристика агранулоциов

1. Типы клеток: лимфоциты и моноциты.

2. Размеры: малые 4,5-6 мкм; средние 7-10 мкм; большие - больше 10 мкм.

3. Форма: Моноциты: часто содержит в большом количестве мелкую азурофильную зернистость. Нередко в цитоплазме содержатся вакуоли, расположенные возле ядра, фагоцитированные клетки, пигментные зерна и др. Лимфоциты: узкий ободок базофильной цитоплазмы, в которой содержатся свободные рибосомы и слабо выраженные органеллы - эндоплазматическая сеть, единичные митохондрии и лизосомы.

4. Ядро: Моноциты: ядро занимает большую или равную с цитоплазмой часть клетки. Лимфоциты: относительно крупное круглое ядро, состоящее в основном из гетерохроматина.

5. Функции: В-лимфоциты и плазмоциты обеспечивают гуморальный иммунитет - защиту организма от чужеродных корпускулярных антигенов (бактерий, вирусов, токсинов, белков и других); Т-лимфоциты по выполняемым функциям подразделяются на: - киллеров; - хелперов; - супрессоров. Киллеры или цитотоксические лимфоциты обеспечивают защиту организма от чужеродных клеток или генетически измененных собственных клеток, осуществляется клеточный иммунитет. Т-хелперы и Т-супрессоры регулируют гуморальный иммунитет: хелперы - усиливают, супрессоры - угнетают.

6. Продолжительность жизни: от многих лет (В-клетки памяти) до нескольких недель (клоны плазматических клеток).

Рис. 3 Лейкоформула взрослого человека.

Препарат. Мазок крови человека:

Окраска по Романовскому-Гимзе. (Краситель Романовского – Гимзы состоит из щелочной и кислой частей. Щелочная часть – азур II, а кислая часть – эозин. Азур II окрашивает в ярко-синий цвет, эозин – в розово-красный). На препарате необходимо найти и зарисовать эритроциты, окрашенные эозином в розовый цвет. Так как эритроциты имеют форму двояковогнутого диска, центральная часть их более тонкая и имеет более светлую окраску. Эритроциты самые многочисленные клетки крови, и на мазке они составляют большинство. Среди эритроцитов видны лейкоциты (1 – 5 в поле зрения).

Наиболее часто встречаются сегментоядерные нейтрофилы, имеющие темно-фиолетовое сегментированное ядро и почти прозрачную (слабо-розовую) цитоплазму с очень мелкой, трудно различимой зернистостью. Эозинофильные гранулоциты, наоборот, отличаются ярко выраженной оксифилией цитоплазмы, заполненной крупными розовыми гранулами одинаковых размеров. Ядро менее плотное, чем у сегментоядерного нейтрофила, обычно имеет два сегмента, но может быть и три. Базофильные гранулоциты встречаются редко, поэтому их следует посмотреть и зарисовать с демонстрационного препарата. Для них характерны бледные, не всегда полностью сегментированные ядра и фиолетовые разных размеров (преимущественно крупные) гранулы в цитоплазме.

Лимфоциты в отличие от гранулоцитов имеют округлое ядро и малый ободок цитоплазмы. Хроматин ядра резко конденсирован, поэтому на препаратах имеет темно-фиолетовую окраску. Малые, средние и большие лимфоциты отличаются друг от друга по размерам и плотности ядер. Малые лимфоциты имеют очень конденсированный хроматин в ядре и узкий ободок цитоплазмы. Хроматин ядра среднего лимфоцита несколько более дисперсный, а ободок цитоплазмы шире. Ядро большого лимфоцита еще более крупное и рыхлое, а объем цитоплазмы увеличен.

Моноциты легче найти на периферии мазка. Это крупные клетки, имеющие обширную зону цитоплазмы голубого цвета и крупное бобовидное или неправиьной формы бледно окрашенное ядро.

Кровяные пластинки имеют небольшие размеры (в три раза меньше эритроцита), расположены небольшими группами между клетками и имеют слабо-фиолетовую окраску.

Мазок крови лягушки:

Кровь других позвоночных по своему составу сходна с кровью человека, но в морфологии клеточных элементов у различных групп животных имеются свои особенности.

На препарате при большом увеличении видно, что среди форменных элементов крови преобладают красные кровяные клетки – эритроциты. В отличие от эритроцитов человека они представляют собой крупные овальные двояковыпуклые клетки с гомогенной протоплазмой. Центр клетки занимает ядро, имеющее овальную форму, интенсивно окрашивающееся гематоксилином в сине-фиолетовый цвет. Цитоплазма этих клеток окрашивается эозином в оранжево-красноватый цвет за счет гемоглобина, растворенного в теле этой клетки. В 1 мм3 крови содержится около 380 тыс. эритроцитов. Лейкоцитов содержится значительно меньше (в 1 мм 3 крови – от 6 до 25 тыс.): гранулоциты и агранулоциты. В количественном отношении у человека преобладают зернистые, у амфибий незернистые, а именно лимфоциты – округлые клетки, более мелкие, чем эозинофилы и эритроциты, с плотным округлым ядром и узкой каймой голубой (базофильной) цитоплазмы. Часто эти клетки имеют короткие, неправильной формы псевдоподии.

Лейкоциты по своей структуре очень похожи на таковые человека. Среди гранулоцитов встречаются нейтрофилы, эозинофилы (округлые клетки, по величине превышающие эритроциты, с 3 – 4 сегментным плотным ядром и ярко-оранжевой зернистостью в цитоплазме), базофилы. Среди агранулоцитов – лимфоциты и моноциты.

На препарате встречаются тромбоциты – клетки, расположенные группами от 3 до 6. Тромбоциты значительно меньше эритроцитов; в отличие от эритроцитов их протоплазма почти не окрашивается. Тромбоциты амфибий являются настоящими клетками, обладающими ядром. Форма клетки и ядра – овальная.

5. Забор крови из пальца. Исследование реологических параметров крови. Изучение деформабильности эритроцитов; агрегации эритроцитов с помощью Агрегометра MA-1, фирмы «Myrenne». Ознакомление с принципом работы биохемилюминометра БХЛ-3606М. Биохемилюминесцентный анализ цельной крови человека. Спектрофлуориметрический анализ

Реологические параметры крови:

Составляя примерно половину объема всей крови, форменные элементы крови - клетки обеспечивают важнейшие ее функции. Эритроциты - наиболее многочисленная фракция клеток, их количество в 1 мкл крови около 5 млн. В крови низших позвоночных эритроциты обладают всем комплексом внутриклеточных органоидов, в том числе ядром, и делятся путем митоза или амитоза. У млекопитающих во время созревания эритроциты теряют внутриклеточные органоиды и ядро, при этом они приобретают двояковогнутую форму и утрачивают способность к делению. Средний диаметр эритроцитов взрослого человека около 7 мкм, новорожденного до 10 мкм. Форма эритроцитов изменяется благодаря эластичности их мембраны, что позволяет им проходить через капилляры, большинство которых имеют диаметр 5 мкм. Известны примерно пять нормальных форм эритроцитов и до 10 патологических. Поддержание формы клеток обеспечивается за счет энергии содержащейся в них АТФ, которая образуется в процессе гликолиза, поэтому эритроциты активно потребляют глюкозу.

По сравнению с мембранами других клеток, мембраны эритроцитов изучены наиболее полно. Белки занимают около 1/4 поверхности мембраны, "плавая" на двойном слое липидов и частично или полностью его пронизывая. Общая площадь мембраны одного эритроцита достигает 140 мкм2, ее масса 10-12 г. Липиды (холестерин, нейтральные липиды, лецитин) составляют около 40% сухого остатка мембраны, 10% приходится на углеводы. Один из белков мембраны - спектрин располагается на ее внутренней стороне, непосредственно над цитоплазмой, образуя упругую выстилку, благодаря которой эритроцит не разрушается, изменяя форму при движении в узких капиллярах и при колебаниях рН, температуры, осмотических показателей. В одном эритроците насчитывается около 200 000 молекул спектрина. Другой белок - гликофорин, представляющий собой гликопротеид, пронизывает липидные слои мембраны и выступает наружу. К его полипептидным цепям присоединены группы моносахаридов, связанные, в свою очередь, с молекулами сиаловой кислоты. Общее число молекул этого белка до 500 000 в одном эритроците.

Часть транспортируемых кровью веществ растворена в плазме, а другая часть соединяется с белками и клетками крови. Билирубин (вещество желтого цвета, образующееся в результате разрушения гемоглобина при старении эритроцитов) соединяется с альбуминами плазмы в соотношении 5:1 и транспортируется к органам выделения: почкам, печени, кишечнику. Липопротеиды плазмы транспортируют холестерин - один из распространенных фосфолипидов, входящих в состав мембран. Избыточное отложение этого вещества в стенках кровеносных сосудов связывают с развитием атеросклероза.

Белки плазмы переносят также ионы, токсичные в свободном состоянии (железо, медь), к органам, где они используются в процессах биосинтеза. Благодаря транспорту создается временное депонирование некоторых веществ. Так, эритроциты транспортируют инсулин, который в связанном состоянии неактивен, а также альбумин, глюкозу, аминокислоты. Один эритроцит способен присоединить до 109 молекул альбумина. Альбумин в свою очередь, является переносчиком продуктов метаболизма при онкологических заболеваниях. И повышение его концентрации в крови четко указывает на существующую патологию, связанную с раковой опухолью.

Для исследования способности эритроцитов к деформации используют различные экспериментальные методы:

1. Метод аспирации эритроцитов в микропипетку, имеющую внутренний диаметр 2,8-3 мкм;

2. Метод центрифугирования - о способности эритроцитов к деформации судят по изменению их размеров под действием центробежных сил;

3. Метод фильтрации - определяют скорость прохождения эритроцитов через бумажные, нитроцеллюлозные или поликарбонатные фильтры, имеющие фиксированные размеры пор (3 мкм);

4. Реоскопия - измеряют под микроскопом размеры эритроцитов, деформируемых потоком жидкости;

5. Эктацитометрия - в основе этого метода лежит явление дифракции лучей гелий-неонового лазера на тонком слое эритроцитов, деформируемых потоком вязкой жидкости, что приводит к изменению дифракционной картины, по которой судят о деформабильности эритроцитов

При активации эритроцитов и тромбоцитов возникает однотипная реакция, завершающаяся активацией фосфолипазы. В результате мембрана клетки становится податливой и может вступать в контакт с соседними клетками. Вследствие этого тромбоциты могут агрегировать друг с другом и образовывать тромбоцитарный тромб. Активирование тромбоцитов - очень важный этап гемостатического процесса, ибо он лежит в основе как нормального гемостаза, так и патологического образования тромбов и диссеминированного внутрисосудистого свертывания. Постоянное избыточное активирование тромбоцитов - один из существенных этапов атерогенеза и сосудистых поражении. Вместе с тем из-за нарушения активации эритроцитов, замедления или прекращения адгезии и агрегации, усиления дезагрегации возникают тяжелые геморрагии. Активация тромбоцитов главным образом связывается с приобретением пластинками способности к полноценным адгезии и агрегации. Агрегация тромбоцитов может быть обратимой и необратимой. Агрегация обратимая непосредственно трансформируется в агрегацию необратимую.

Рис. 4 Устройство для определения деформабильности эритроцитов

Агрегация быстрая необратимая, когда на тромбоциты действуют тромбин, а также коллаген и АДФ в высоких концентрациях. Последние тоже увеличивают выведение Са2+ в цитоплазму. В настоящее время распространенные способы оценки агрегации эритроцитов заключаются в исследовании скорости и степени уменьшения оптической плотности (увеличения светопропускающей способности) тромбоцитарной плазмы при перемешивании с индукторами агрегации (при изучении спонтанной агрегации они не добавляются). Образование агрегатов тромбоцитов под действием стимуляторов может быть оценено также визуально, или с помощью микроскопа. Наиболее существенными для кровообращения являются показатели, характеризующие гидродинамическую прочность, скорость образования и размер агрегатов.

Прочность агрегатов, т.е. способность разрушаться при высоких скоростях сдвига, определяет их судьбу в артериальной системе, а значит и судьбу микроциркуляции. Нормальная (физиологическая) агрегация имеет характер линейных цепочек в виде монетных столбиков, состоящих из 5-6 клеток и возможной полной гидродинамической дезагрегации эритроцитов в сосудистом русле

Сетчатая и глыбчатая агрегация с увеличением прочности сцепления между эритроцитами есть главный признак патологической агрегации. Глыбчатая агрегация превращает кровь из эмульсии в грубую суспензию, т.к. агрегация, сохраняющаяся при высоких скоростях сдвига. Факторы, показывающие суспензионную стабильность крови и определяющие увеличение когезии между клетками, могут быть эритроцитарные, т.е. связанные с изменением формы или модификации поверхности мембраны эритроцитов, и плазменные-изменение белкового состава плазмы.

Поиск по сайту: