Лабораторная работа №1. Цель:изучение агрегометрических параметров крови человека

Цель: изучение агрегометрических параметров крови человека.

Приборы и оборудование: скарификаторы стерильные, спиртовые шарики, вата, пробирки, микропипетки, капилляры, агрегометр MA-1

Ход работы:

1. У испытуемого берут кровь в объеме 1-2 мл

2. Каплю крови помещают на стекло прибора, закрывают крышку

3. Проводят измерение в 2 режимах: M(статический) и M1(динамический);

4. Записывают результаты открывают крышку, удаляют кровь спиртовым шариком

5. Повторяют измерения 3 раза и оценивают среднее значение

Рис. 5 Агрегометр MA-1, фирма «Myrenne».

Биохемилюминесцентный анализ

Основоположник метода биохемилюминесценции А.Г. Гурвич показал возможность передачи информации из одной клетки в другую фотонами электромагнитного поля и высказал гипотезу о существовании в живых системах полей, которые он назвал «биологическими». Факт существования сверхслабого электромагнитного излучения в настоящее время общепризнан и экспериментально обнаружен у всех исследованных клеток растений и животных. Как оказалось, так называемое спонтанное свечение биологических объектов является универсальным свойством живых клеток.

Любая клетка живого организма обладает собственной люминесценцией, которая обязана своим происхождением различным компонентам ее структуры и метаболизма. Свечение, сопровождающее химические реакции, называется хемилюминесценцией. Один из примеров биохемилюминесценции – это свечение, наблюдаемое при взаимодействии органических радикалов, получаемых электрохимическим путем. При взаимодействии радикалов (имеющих противоположный заряд и потому притягивающихся друг к другу) перенос электрона может произойти таким образом, что два электрона окажутся на разных уровнях. Последнее означает, что один из внешних электронов оказывается не на самом нижнем свободном электронном уровне, как у исходных молекул, а на вышележащем электронном уровне. Такая молекула при переходе в основное состояние испускает квант света.

Весь процесс можно разделить на три стадии:

1. Восстановление одного из участников реакции (присоединение электрона) и окисление второго (отрыв электрона). Это приводит к запасанию химической энергии в системе, которая позднее выделится в виде фотона;

2. Перенос электрона (окислительно-восстановительная реакция) не на самый нижний, а на один из более высоких энергетических уровней и образование, таким образом, продукта реакции в электронно-возбужденном состоянии;

3. Высвечивание фотона при переходе молекулы из электронно-возбужденного в основное состояние (люминесценция).

Поскольку каждый элемент люминометра обладает своей спектральной чувствительностью, измеряемое свечение не является истинным. Для того чтобы получить истинный уровень свечения, необходимо внести поправки на чувствительность прибора. В данной работе используется наиболее простой метод получения кривой спектральной чувствительности прибора – измерение свечения вещества с уже известным истинным уровнем свечения. В качестве такого вещества используется эталонный раствор, который помещается в первую ячейку кюветного барабана.

В то же время кровь человека содержит клеточные элементы, размеры, форма и коэффициент преломления которых, меняясь в широком диапазоне, определяют рассеивающие и поглощающие свойства объекта исследования. Это означает, что даже при условии постоянства квантового выхода люминесцирующего вещества получение абсолютных данных о его свойствах по измеренной интенсивности люминесценции – крайне трудная задача. Однако, учитывая, что в данном случае представляют интерес не столько данные об абсолютном уровне свечения, сколько сведения о динамике этого уровня в процессе изменения функционального состояния организма, достаточно постоянства свойств пробы.

При измерениях важно контролировать и изменять условия опыта. Поэтому биохемилюминометр снабжен термостатом, который поддерживает определенную температуру кювет. Отсутствие освещения и постоянная температура в изолированном кюветном барабане позволяют создавать в кювете условия, близкие к физиологическим.

Поиск по сайту: