Этапы приготовления окрашенных микропрепаратов

[фиксация материала; проводка (обезвоживание материала); заливка (уплотнение) материала; приготовление гистологических срезов на микротоме (рис. 2); окрашивание срезов после их монтирования (приклеивания) на предметное стекло и удаления из них парафина; заключение (монтирование) срезов в прозрачную застывшую консервированную среду – смолу хвойных деревьев (бальзам) или синтетические среды – смолу хвойных деревьев (бальзам) или синтетические среды – осуществляется после их обезвоживания и просветления].

Применяемы гистологические красители разделяются на две главные группы: основные и кислые.

Основные (например, гематоксилин, толуидиновый и метиленовый синий, азур II) активно связываются со структурами, содержащими кислоты (например, ДНК или РНК) и несущими отрицательный заряд. Способность окрашиваться основными красителями называется базофилией (от греч. basis – основание и philia – любовь), а структуры, связывающие эти красители – базофильными. Базофилией в клетке обладает ядро - вследствие высокого содержания ДНК и РНК), а также цитоплазма – при высоком содержании в ней рибосом или грЭПС. Базофильно может окрашиваться межклеточное вещество некоторых тканей (например, хрящевой).

Метахромазия (от греч. meta – изменение и chroma – краска) – изменение цвета отдельных основных красителей (например, толуидинового синего, азура II или тионина) при их связывании с некоторыми структурами, обладающими специфическими химическими свойствами (обычно высокой концентрацией сульфатированных гликозаминогликанов). Способность окрашиваться метахроматически обладают гранулы базофильных лейкоцитов и тучных клеток, а также основное вещество хряща. Указанные красители окрашивают другие базофильные структуры в тех же тканях в обычный свойственный им цвет (ортохроматически – от греч.orthos – правильный и и chroma – краска).

Избирательное (элективное, специальное) окрашивание препаратов, в отличие от общеобзорных методов, выявляет не общую морфологическую картину, а какие-то конкретные структуры, обладающие высоким сродством к определенным красителям. Так, для избирательного выявления в тканях эластических элементов (волокон, мембран) применяют окраску орсеином; жировые клетки и липидные включения в различных клетках окрашивают суданом III или четырехокисью осмия; ретикулярные волокна, нервные и некоторые эндокринные клетки – импрегнацией (от лат. impregnatio – пропитывание) солями серебра.

Импрегнация - методвыявления структур клеток и тканей, основанный на различной их способности удерживать или восстанавливать соли тяжелых металлов (серебро, свинец, осмий, золото).

ШИК – или (PAS) –реакция – пример одного из наиболее широко используемых гистохимических методов. Название метода происходит от сокращения терминов Шиффа (реактив) – Иодная Кислота (по англ. Periodic Acid Schiff). Метод используется для выявления соединений, богатых углеводными группами – гликогена, гликопротеинов, мукопротеинов, протеогликанов и др. Он основан на окислении иодной кислотой гидроксильных групп сахаров до альдегидных, с которыми связывается бесцветный реактив Шиффа (содержащий фуксин), превращаясь в стабильное соединение красного цвета.

Кислые красители (например, эозин, пикриновая кислота, эритрозин, оранж G, лихтгрюн) связываются с различными структурами, несущими положительный заряд, вызывают их контрастирование окрашиванием в цвета красителя (красного, желтого, оранжевого, зеленого). Способность окрашиваться кислыми красителями называется оксифилией, или ацидофилией (от греч. oxys или лат. acidus – кислый и греч. philia – любовь), а структуры, связывающие эти красители – оксифильными, или ацидофильными. Оксифилия свойственна цитоплазме клеток (в особенности, при высоком содержании в ней митохондрий и некоторых белковых секреторных гранул), эритроцитам (благодаря высокой концентрации в них гемоглобина). Оксифильно окрашивается цитоплазма мышечных клеток сердца (кардиомиоцитов), мышечных волокон скелетной мускулатуры, некоторые компоненты межклеточного вещества (например, коллагеновые волокна).

Комбинированное окрашивание препаратов (нейтральные красители) основано на использовании как основных, так и кислых красителей, обладающих контрастирующими цветами. Наиболее распространённая обще обзорная окраска гистологических препаратов сочетает гематоксилин (основной краситель) с эозином (кислым красителем). Структуры, воспринимающие нейтральные красители, называются нейтрофильными.

Поиск по сайту: