Лабораторная работа №2. Цель: ознакомиться с принципом работы биохемилюминометра БХЛ-3606М, оценить характер люминол-зависимой биохемилюминесценции цельной крови человека в норме

Цель: ознакомиться с принципом работы биохемилюминометра БХЛ-3606М, оценить характер люминол-зависимой биохемилюминесценции цельной крови человека в норме.

Приборы и материалы: биохемилюминометр БХЛ-3606М, растворлюминола, 0,9% р-р NaCl, компьютер, термостат, сухие ватные шарики, спиртовые ватные шарики, гепаринизированные капилляры, скарификатор, дозатор.

Ход работы:

1. Произвести забор капиллярной крови (из пальца). Техника взятия капиллярной крови, стандартная: протерев кожу пальца ватным спиртовым шариком, делается прокол индивидуальным стерильным скарификатором. Первую выступившую каплю крови необходимо вытереть, а следующей каплей заполнять гепаринизированный капилляр.

2. Кровь в объеме 75 мкл, хранившуюся не более 6 часов, внести в кювету с 2 мл люминола в физиологическом растворе NaCl 0,9н в барабан биохемилюминометра;

3. Туда же поместить кювету с контрольным раствором. В качестве контроля для измерения фонового свечения, постоянно присутствующего в окружающей среде, используют раствор люминола в физиологическом растворе 0,9н NaCl;

4. По полученным графикам свечения рассчитать светосумму за 10 минут с момента наступления стационарной фазы свечения.

Рис. 6 Устройство для оценки биохемилюминесценции. Биохемилюминометр БХЛ-3606М

Спектрофлуориметрический анализ
Флуоресценция

Это выделение излучения, обычно света, из вещества, атомы которого получили избыточное количество энергии при бомбардировке частицами, как правило, ультрафиолетового излучения электронов.

Типичное время жизни такого возбужденного состояния составляет 10-11-10-6с.

Флюоресценция прекращается при отсутствии источника энергии, что говорит о необходимости возбуждающего излучения для проведения достоверных исследований.

Длительность пребывания молекул в возбужденном состоянии определяется естественным (радиационным) τ0 и реальным τ1 временем жизни энергетического уровня.

Реальное время жизни τ определяется вероятностью всех процессов, уменьшающих заселенность возбужденного состояния, т.е.

Важнейшей характеристикой флуоресценции является ее выход ‒ величина, определяющая долю переходов с испусканием по отношению ко всем процессам, уменьшающим заселенность возбужденного состояния.

Различают квантовый выход γ- отношение числа фотонов Nис, испускаемых единицей объема вещества в единицу времени, к числу поглощенных фотонов и энергетический выход Г ‒ отношение испускаемой энергии Uис и поглощенной U:

Флуоресцеин

Флуоресцентный перенос энергии – это перенос энергии возбужденного состояния от донора к акцептору. Скорость переноса энергии зависит от степени перекрывания спектров испускания донора со спектром поглощения акцептора.

Однако при флуоресцентном переносе энергии никакого промежуточного испускания и поглощения фотона не происходит – в основном, он является результатом диполь-дипольных взаимодействий между донором в возбужденном состоянии и акцептором.

Поиск по сайту: