Биологическая проба. Наиболее чувствительными лабораторными животными является гвинейские свинки и белые мыши

Наиболее чувствительными лабораторными животными является гвинейские свинки и белые мыши. До заражения животных прибегают тогда, когда исследуемый материал сильно загрязнен посторонней микрофлорой и высеять из него чистую культуру трудно. Кровь больных, ликвор, экссудат из суставов вводят в брюшную полость (гвинейским свинкам 2-3 мл, мышам - 0,5-1,0 мл). Осадок мочи, околоплодных вод, молока вводят подкожно в паховой области. Через 20-30 дней после заражения проводят вскрытие животных, сеют кровь из сердца и эмульгированные паренхиматозные органы и лимфатические узлы на жидкие и плотные элективные среды. Перед посевом у свинок берут кровь из сердца для постановки реакции агглютинации с целью выявления антител. Положительной биопробу считают тогда, когда выделяют бруцеллы любого вида, или при положительной реакции агглютинации в разведении сыворотки 1:20 и более. Для выявления бруцеллезной антигенов в сыворотке крови, которые могут быть свободными или в виде циркулирующих иммунных комплексов, применяют РНГА при использовании эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифичних антигенов бруцелл. Используют также реакцию коаглютинации и преципитации, а также метод иммуноферментного анализа.

Серологические исследования

Серологические исследования при бруцеллезе включают реакцию агглютинации Райта, ускоренные пластинчатые реакции на стекле: Хеддлсона, рас-бенгал, латексагглютинации, непрямую реакцию гемолиза. С объемных серологических реакций используют РСК, реакции Кумбса (для выявления неполных антител), РНГА, ИФА, РИФ, опсонофагоцитарну пробу. Из них чаще всего используют реакции Райта, Хеддлсона и РНГА.

Реакция Райта

Реакция Райта - один из основных официальных методов диагностики бруцеллеза во всех странах. Она проста по технике постановки, весьма чувствительна и специфична, оказывается в начале заболевания, достигает диагностического титра на второй неделе и сохраняется положительной в течение 1-4-х лет. Следовательно, ее можно использовать как для диагностики острого периода болезни, так и для установления ретроспективного диагноза. Реакцию ставят по классической схеме в пробирках методом одинаковых объемов. Примечание: КС - контроль сыворотки, КД - контроль диагностикума. Сыворотку больного и диагностикум разводят изотоническим раствором хлорида натрия, к которому заранее добавляют 0,5% фенола (карболизований изотонический раствор). При постановке реакции Райта и Хеддлсона используют единый бруцеллезной диагностикум, который является 10 млрд взвесью убитых нагреванием и фенолом бруцелл, окрашенных анилиновых красителей в синий цвет. Перед постановкой реакции его разводят в 10 раз. Пробирки встряхивают и ставят в термостат на 18-20 ч, затем еще выдерживают 2 часа при комнатной температуре и учитывают результаты обычным способом или по 50% агглютинации (2 +). Серийные разведения 50% агглютинации 1:50, 1:100-1:800 свидетельствует о том, что 1 мл сыворотки больного содержит соответственно 50, 100... 800 МЕ антител. Интенсивность реакции оценивают по следующей схеме: 50 МЕ-реакция сомнительная, 100-200 МЕ - положительная, 400-800 МЕ - резко положительная. Реакция Райта может быть положительной у переболевших ранее и у привитых лиц, поэтому с развитием болезни ее ставят повторно и учитывают нарастание титра антител. Часто используют микрометод реакции агглютинации на стекле - пластинчатую реакцию Хеддлсона, особенно при массовых обследованиях на бруцеллез. Для этого хорошо обезжиренную стеклянную пластину 8x12 см разделяют восковым карандашом на 6 одинаковых квадратов. Неразведенную сыворотку больного и бруцеллезной диагностикум наносят с помощью пипеток согласно схеме. Капли сыворотки и антигена смешивают осторожным покачиванием пластины или стеклянной палочкой, слегка подогревают над пламенем газовой горелки. Максимальный срок наблюдения 8 мин. При положительной реакции в смешанных каплях появляются хлопья, а жидкость становится более-менее прозрачной. Агглютинация во всех 4-х квадратах оценивается как резко положительная, в 3-й и 4-й дозах - положительная, во 2-й дозе - слабо положительная - и только в дозе 0,8 мл - сомнительна. Отсутствие агглютинации со всеми дозами сывороток оценивают как отрицательную реакцию. Для ускоренной диагностики бруцеллеза используют также реакцию агглютинации бенгальского розового с кислым антигеном. Антиген готовят из густой взвеси бруцелл, убитых нагреванием, с использованием буферного раствора (рН 3,6 - 3,8) и красителя бенгальского розового. На стеклянную пластинку наносят 0,03 мл неразведенной сыворотки и 0,03 мл антигена, смешивают их круговым движением стеклянной палочки. Результат реакции учитывают через 4 мин. Появление крупно-или мелкозернистой аглютинату свидетельствует о положительной реакции. Реакция связывания комплемента относится по обычной схеме. Она становится положительной с 20-25-го дня заболевания и долго хранится. Постановку опсоно-фагоцитарной пробы последнее время проводят редко. Зато стали широко использовать РНГА.

Поиск по сайту: